[发明专利]一种用于检测疟原虫的胶体金快速免疫层析检测试纸及抗体和细胞株

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体地说，涉及一种用于检测疟原虫的胶体金快速免疫层析检测试纸及抗体和细胞株。 

背景技术

疟疾是广泛流行于热带、亚热带及温带边缘地区的一种重要虫媒传染病。在所有虫媒传染性疾病中，疟疾是发病率和死亡率最高的疾病之一。目前世界上仍有90多个国家、24亿人生活在疟疾流行区。每年有5亿人发病，250多万人死亡。发病和死亡的病例中，90%是在非洲和亚洲的贫穷国家。据不完全统计，目前中国全国估计每年有25－30万人发病。另外，疟疾还是造成进入疟区部队非战斗减员的主要疾病之一。面对疟疾对人类造成的严重威胁，世界卫生组织（WHO）提出进一步研究与开发更有效的疟疾防治药物和诊断技术，以达到2010年全球疟疾死亡人数减少50%，2015年再减少50%的目标。 

由于受各种因素的影响，疟疾疫苗的研制进展缓慢，因此实现疟疾的快速有效的诊断和治疗就显得尤为重要。八十年代以来，随着分子生物学的发展和基因诊断技术的出现，疟疾诊断方法也在不断改进，显示了较高的敏感性和特异性，且实现了疟疾的早期快速诊断。然而，这些方法都需要使用复杂的仪器设备和技术条件，所以难以在基层推广应用。 

以检测疟原虫特异性抗原为基础的免疫学方法具有快速、简便、可靠等优点，在疟疾诊断上日益受到重视。免疫学检测主要是利用单克隆抗体检测疟原虫的特异性抗原（即所谓抗原捕获法）。根据疟疾流行区偏僻、落后的特点，迄今已开发了多种适合疟疾流行区现场使用的免疫层析检测方法和相应的试剂条。其原理为利用硝酸纤维素膜制备免疫层析测试条，在硝酸纤维素膜上包被抗被检抗原的一株单克隆抗体作为捕获带，同时，将另一株单克隆抗体偶联在胶体金或乳胶上作为检测试剂。当样品溶液和检测试剂通过捕获带时，二者形成的复合物即被包被在膜上的抗体捕捉，如果样品中含有被检抗原，则捕获带可发生颜色反应，并且颜色反应的强弱与样本中的抗原浓度成正比。 

目前报道的疟原虫诊断靶抗原主要有富组氨酸蛋白II （HRPⅡ）和乳酸脱氢酶（LDH）。HRP-II是恶性疟原虫感染、特别是急性感染病人血清中存在的一种特异性标志，几乎在整个红内期均有分泌，在感染机体的血清中含量很高，有种特异性，且为暴露的抗原成分，被认为是理想的恶性疟原虫诊断抗原。检测恶性疟原虫的商品检测条ParaSight-F(dipstick)和ICT Malaria P.f(ICT1)都是基于HRPⅡ建立的。但基于靶抗原HRPII的诊断方法存在某些缺点，包括：HRPII只存在于无性期和早期配子体中，故不能检测仅含有成熟配子体的血液样品；临床症状已消失、血液中虫体已被清除之后，HRPII仍会存在很长一段时间；由于抗HRPII单克隆抗体可能与类风湿因子产生交叉反应，因而可能导致假阳性。 

乳酸脱氢酶（LDH）：LDH是另一种引人注意的疟原虫循环抗原，因其具有不同于人类红细胞LDH的独特理化和免疫化学性质，在疟疾诊断方面具有重要的应用价值。不同种属的疟原虫之间既具有各自的特异性，又具有交叉反应，但都与人红细胞和哺乳类LDH无交叉反应，这些特性为疟原虫抗原检测方法的建立提供了有利的理论依据。另外，LDH作为疟疾诊断抗原，还有以下两个优点： 在各种疟原虫LDH之间不但有共同抗原表位，还具有种特异的抗原表位，因而能同时鉴别诊断恶性疟和间日疟； LDH仅由活虫体产生，因此可用于鉴别虫的死活，监测治疗效果及复燃情况。国外已有疟原虫LDH制成OptiMAL和ICT Malaria P.f/P.v (ICT2)等免疫诊断试剂盒的报道，可同时诊断恶性疟和间日疟。但两种方法都是利用恶性疟原虫的LDH来制备属特异性抗体，通过排除法来诊断间日疟。在层析条上包被两株LDH单克隆抗体，一株为恶性疟种特异性单克隆抗体，另一株为能与恶性疟原虫和间日疟原虫都反应的属特异性单克隆抗体，如两条抗体带均出现红色反应带，即为恶性疟或恶性疟与间日疟混合感染；如只有属特异性单克隆抗体带出现反应，则为间日疟感染。此种方法的缺点是当两条抗体带均出现反应时，无法对恶性疟和混合感染进行鉴别诊断。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种用于检测疟原虫的胶体金快速免疫层析检测试纸。 

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 

一种杂交瘤细胞系4F6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.3954。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏日期：2010年6月25日。分类命名：恶性疟原虫/间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体杂交瘤细胞株。