[发明专利]抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，具体地说，涉及编码包含人源CD19抗体可变区与人源CD3抗体可变区片段的重组融合蛋白的DNA、其所编码的融合蛋白、该融合蛋白的生产方法、该融合蛋白的药物用途和该融合蛋白的治疗方法。

发明背景

B细胞淋巴瘤是一种发病率较高的恶性肿瘤，严重危害人类健康，目前其抗体药物疗法已经被肯定，已有抗体药物如美罗华(Rituximab)等上市。针对B细胞淋巴瘤的抗体药物靶点主要是B淋巴瘤细胞特异表达增高的CD分子，如CD19、CD20和CD22等。针对这些CD分子的抗体药物能够诱导B淋巴瘤细胞凋亡，从而达到治疗疾病的目的。

免疫疗法也是一种比较常用的抗肿瘤治疗方法，其中细胞免疫在抗肿瘤方面具有十分重要的作用。免疫细胞中的T淋巴细胞是杀伤肿瘤的重要细胞，其表面有CD3、白介素-2受体等表面分子。研究表明，CD3抗体和白介素-2配体可以有效地激活T淋巴细胞，诱导其活化和增殖，从而提高杀伤肿瘤细胞的活性，这些已被应用于肿瘤的免疫疗法。然而，由于缺乏靶向肿瘤细胞的功能，因此激活的T淋巴细胞难以十分有效地富集于肿瘤部位，导致其杀伤肿瘤效能不足。因此，可以把CD3抗体等能够激活T淋巴细胞的分子与靶向B淋巴瘤细胞的分子如CD19抗体融合，这样就能够有效地在B淋巴瘤细胞周围富集和激活T淋巴细胞，从而大大提高了杀伤肿瘤细胞的效果。

人体内天然抗体由重链和轻链组成，其中的重链和轻链可变区结构在抗原的识别中发挥关键作用。近年来人源抗体的出现，克服了原来鼠源抗体疗法引起的HAMA(Human antimousantibody)发生，大大提高了临床治疗效果。人源抗体相对与人源化的抗体相比，不但具有全人的氨基酸序列，而且空间结构上也与人抗体结构一致，其免疫原性很低，因此比鼠源改造的人源化的抗体更有优势，具有极大的临床应用前景。

鉴于此，本发明提供了一种双特异性抗体，其不但能够靶向B淋巴瘤细胞，而且能够激活T淋巴细胞，大大提高了杀伤B淋巴瘤细胞的效果。而且，此双特异性抗体为全人源蛋白序列，具有极低的免疫原性，极大地提高了本发明双特异性抗体的应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种包含CD19scFv和CD3scFv的人源双特异性抗体蛋白，其在体内外都具有良好的生物活性和稳定性，能够结合CD19和CD3阳性的细胞，并且能够激活人T淋巴细胞，杀伤B淋巴瘤细胞。

本发明解决技术问题的技术方案是提供一种抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体。该抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体，由来自抗CD19抗体的可变区与抗CD3抗体的可变区构成，之间由一条连接肽(Linker)相连。

其中，上述抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体中的CD19抗体可变区由轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)融合而成。CD19抗体可变区可表示为CD19scFv，CD19抗体可变区的轻链可变区和重链可变区的排列方式，可以为VL-VH，也可以为VH-VL。进一步的，轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)间由连接肽连接形成抗体可变区。常用的连接肽的氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS，可表示为(G4S)3。

优选的，上述抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体中的CD19抗体可变区的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。

其中，上述抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体中的CD3抗体可变区由轻链和重链融合而成。表示为CD3scFv。

CD3抗体可变区可表示为CD3scFv，CD3抗体可变区的轻链可变区和重链可变区的排列方式，可以为VL-VH，也可以为VH-VL。进一步的，轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)间由连接肽连接。常用的连接肽的氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS，可表示为(G4S)3。

优选的，上述抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体中的CD3抗体可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。

其中，上述抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体中连接肽的目的在于提供更好的柔韧性，以避免CD19scFv和CD3scFv或者在scFv内的轻链可变区和重链轻链可变区间形成结构上的空间位阻，因此连接肽氨基酸序列和长度均可以有一定的变化。常用的连接肽的氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS，可表示为(G4S)3。

进一步的，上述抗B细胞淋巴瘤的双特异性抗体：

(1)其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；