[发明专利]抗CD3抗体Fv片段与白介素3的融合蛋白、制备方法及其用途

权利要求书

1.融合蛋白，选自下述序列之一：

(a)由SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列构成的氨基酸序列；

(b)具有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的生物学功能、且与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列构成的氨基酸序列；和

(c)具有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的生物学功能，且经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸的SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列构成的氨基酸序列。

2.核酸分子，其编码权利要求1的融合蛋白的基因选自下述序列之一：

(a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12所示的编码EQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11的核苷酸序列；

(b)编码权利要求1中(b)的氨基酸序列的核苷酸序列；

(c)编码权利要求1中(c)的氨基酸序列的核苷酸序列；和

(d)因为密码子简并性而分别与SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6和SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12不同、但是编码与EQ ID NO：1和SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7或SEQ IDNO：9和SEQ ID NO：11所示序列相同的氨基酸序列的核苷酸序列。

3.载体，其可操作地连接有权利要求2所述的核酸分子。

4.权利要求3的载体，所述载体是质粒。

5.宿主菌，其包含权利要求3所述的载体。

6.制备权利要求1的融合蛋白的方法，包括以下步骤：

(a)将CD3VL和IL3通过G4S连接获得CD3VL-IL3片段，CD3VH和IL3通过G4S连接获得CD3VH-IL3片段；再将CD3VL-IL3片段和CD3VH-IL3片段连接到表达载体pAYZ中，得到重组表达质粒pAYZ抗CD3-IL3；分别以含有CD3VL*-IL3、CD3VL-IL3的中间载体pB11d1为模板，扩增编码IL3末尾八个氨基酸的密码子被删除的CD3VL*-ΔIL3、CD3VL-ΔIL3基因片段；以含有CD3VH*-IL3、CD3VH-IL3的中间载体pB11d1为模板，扩增编码IL3末尾八个氨基酸的密码子被删除的CD3VH*-ΔIL3、CD3VH-ΔIL3的基因片段；再将CD3VL*-IL3和CD3VH*-ΔIL3、CD3VL-IL3和CD3VH-ΔIL3的基因片段连接到表达载体pAYZ中，得到重组表达质粒pAYZ抗CD3*-ΔIL3和pAYZ抗CD3-ΔIL3；

(b)在大肠杆菌16C9中诱导表达融合蛋白抗CD3-IL3、抗CD3*ΔIL3和抗CD3-ΔIL3；

(c)纯化步骤(b)中获得的融合蛋白；

(d)任选地，其还包括测定步骤(c)中纯化后的融合蛋白的生物学活性的步骤。

7.药物组合物，其中含有药学有效量的权利要求1所述的融合蛋白，任选地，还含有药学上允许的佐剂。

8.权利要求1的融合蛋白在制备用于肿瘤干细胞靶向治疗的药物中的用途。

9.权利要求8的用途，所述药物用于靶向杀伤白血病干细胞。

10.权利要求9的用途，其中的白血病干细胞是急性髓系白血病干细胞。