[发明专利]环丙氨嗪、三聚氰胺残留二联检快速检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品药物残留免疫学快速检测技术领域。具体涉及环丙氨嗪、三聚氰胺残留二联胶体金免疫层析快速检测试纸条及其制备方法。

背景技术

环丙氨嗪（cyromazine，CA）是一种高效的昆虫生长调节剂。在养殖业中，它主要用做预混剂，通过饲料途径杀灭蝇蛆。环丙氨嗪的主要功能就是控制动物厩舍内的苍蝇、蝇蛆。环丙氨嗪作为预混剂拌入全价料中，通过饲喂方式进入动物体内，其绝大部分（约99％）以原形及其代谢产物（三聚氰胺）的形式随粪便排出体外并沉积在粪便中，从而在粪便中杀灭蝇蛆。环丙氨嗪急、慢性毒性均很低，而且无致畸、致癌、致突变作用，其主要代谢产物三聚氰胺毒性也特别低。环丙氨嗪在动物体内基本不被吸收。鸡摄入环丙氨嗪后，有99．1％被排泄出体外。环丙氨嗪的残留非常低。在鸡体内，肝脏的残留最高，为0.1 ppm，肾脏、肌肉、脂肪，包括鸡蛋的残留均低于0.05 ppm。在羊体内，肝脏、肾脏、肌肉、脂肪的最大残留限制均低于0.03 ppm。

三聚氰胺（Melamine，MA）是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。由于其氮的含量很高，加之其生产工艺简单、成本很低，被一些不法商人用作食品添加剂。2007年，美国爆发宠物食品受污染事件，美国食品药品管理局(FDA)查明：参杂了低于6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的原因。2008年9月，中国甘肃省有14名婴儿患肾结石，导致婴幼儿泌尿系统产生高度结石的罪魁祸首也是配方奶粉中添加了三聚氰胺。两起事件发生后，世界各国和地方政府对于食品和饲料的三聚氰胺的检测趋于高度重视。三聚氰胺是一种白色粉末状物质，呈碱性，pH8.0。与盐酸、硫酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成羟甲基三聚氰胺，在微酸性中与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。其结构式及化学反应关系式如下：

    三聚氰胺     三聚氰酸二酰胺   三聚氰酸一酰胺   三聚氰酸

作为含三个氨基的化合物，三聚氰胺是一种用途广泛的基本有机化工中间产品，可用作黏合剂、复合板、阻燃剂，在涂料、造纸、橡胶、塑料、纺织中有广泛用途。在部分亚洲国家, 它也被用以制造化肥。由于食品和饲料工业用的 “凯氏定氮法”来估算蛋白质含量。因此，三聚氰胺（含氮量为66%左右）被不法商人用作食品添加剂，以达到提升食品检测中的蛋白质含量指标目的，并且三聚氰胺为一种白色结晶粉末，无味，掺杂后不易被发现。

由于三聚氰胺属于化工原料，国内外尚无饲料或动物组织中的国家标准。2007年，农业部颁布了关于饲料中三聚氰胺残留测定方法行业标准(NY/T1372-2007)。2008年10月7日，卫生部、国家质检总局等五部门联合制定了乳品中三聚氰胺临时管理限量值。2008年10月7日国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》国家标准,标准规定了高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱/ 质谱法三种方法为三聚氰胺的检测方法，检测定量限分别为2 mg/kg、0.05 mg/kg、0.01mg/kg。标准适用于原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的定量测定。

目前在食品中环丙氨嗪及其代谢物三聚氰胺的分析检测方法有很多, 包括高效液相色谱法、薄层色谱法、液相色谱- 质谱联用法、酶联免疫法。仪器检测主要存在仪器购置费用昂贵、样品前处理复杂、程序繁琐费时、检测费用高、不能现场操作等缺陷，所以在生产中应用受到限制。ELISA 方法灵敏度高、成本低，在药物残留检测中应用也很广泛，但该方法需要酶标仪等实验室设备，分析时间长，在应用中有局限性。近年来，胶体金免疫层析技术与目前普遍采用的标记免疫分析技术相比，具有简便快速，特异性强、敏感性高，肉眼判断，实验结果易保存，无需特殊仪器设备等优点，因此胶体金技术在药物残留检测领域得到了广泛应用。目前还没有针对环丙氨嗪和三聚氰胺多残留二联检的免疫胶体金试纸条及其制备方法报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的之一在于提供一种特异性强、灵敏度高、且操作简单，对样品简单处理即可同时检测MA、CA药物残留的二联检免疫胶体金试纸条。

    本发明目的之二在于提供一种制备环丙氨嗪、三聚氰胺残留二联胶体金免疫层析快速检测试纸条的方法。