[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征与猪瘟二联疫苗及其用途

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，更具体是涉及一种制备猪繁殖与呼吸综合征与猪瘟二联活疫苗的方法及其制品。 

背景技术

当前，猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪瘟(CSF)是严重危害我国养猪业的两种重要的传染病，自2006年暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征以来(又称高致病性蓝耳病)，给我国的养猪业造成了巨大的经济损失，被农业部列为强制免疫的疫病之一。同时猪瘟也是我国列为强制免疫的疫病之一，因此在防疫过程中，多针次、多剂量、多种免疫程序难以合理安排，既繁琐、费时、费力、增加成本，且容易造成漏种，直接影响免疫效果。采用多联疫苗免疫接种，可以达到“一针防多病”的目的。同时，这两种疫病采取的免疫程序比较接近，这为高致病性猪繁殖与呼吸综合征与猪瘟二联活疫苗的研制提供了可能。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种免疫力高、无免疫干扰的猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗与猪瘟疫苗的二联疫苗组合物，达到一针防两病的目的。 

本发明的目的之二是提供一种制备猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗与猪瘟疫苗的二联疫苗组合物的方法。 

本申请提供了一种疫苗组合物，其含有猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗与猪瘟疫苗。 

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever  Virus，CSFV)引起的一种高度接触传染性、致死性猪传染病，世界动物卫生组织(OIE)将其列入OIE疾病名录，为法定必需报告的传染病。在我国，猪瘟是重大疫病之一，在《一、二、三类动物疫病病种名录》中将猪瘟列入一类动物疫病之一，猪瘟的爆发流行给世界和我国的养猪业造成严重经济损失。 

猪瘟病毒属于黄病毒科，瘟病毒。该病毒是一种有囊膜的正链RNA病毒。基因组全长约12.5kb，仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)，此ORF编码约4000个氨基酸残基，分子量约438kD的多聚蛋白，并进一步在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为12种成熟蛋白，CSFV的所有结构蛋白和非结构蛋白均由该ORF所编码。 

疫苗是控制猪瘟的重要手段，包括灭活疫苗和弱毒疫苗。20世纪50～60年代是猪瘟灭活疫苗研制的高峰时期，在此期间，福尔马林和结晶紫灭活苗被广泛应用。但由于灭活苗存在免疫剂量大、免疫期短、产生免疫力的时间慢、成本较高等缺点，以后逐步被猪瘟弱毒疫苗所取代。猪瘟弱毒疫苗株由猪瘟野毒株致弱而成，国外相继有人报道，用不同方法将不同猪瘟病毒适应于家兔，成为毒力减弱的变异毒株，但这些变异毒株仍可诱发严重反应及死亡。经过多年应用，公认安全有效，没有残余致病力的弱毒疫苗株有三种：①中国兔化弱毒疫苗；②日本GPE(-)细胞弱毒疫苗；③法国“Thiveosal”冷变异弱毒株。其中我国学者研制成功的中国系(C系)猪瘟兔化弱毒疫苗，自1957年起，除在我国广泛应用外，并已推广到欧亚很多国家，使这些国家控制或消灭了猪瘟。该疫苗被公认为目前世界上比较理想的猪瘟疫苗。 

猪瘟兔化弱毒(C株)根据生产工艺的不同分为：第一种工艺是用兔体生产，取接种家兔的淋巴结或脾脏或组织制苗，即猪瘟脾淋苗和猪瘟乳兔苗。该工艺可以有效避免外源病毒污染，同时保证了病毒的遗传稳定性，但需要使用大量家兔，质量控制难度较大，生产成本较高。第二种工艺是应用牛、羊原代细胞或猪传代细胞生产制苗，即猪瘟细胞苗。该工艺避免大量使用实验动物，但存在外源病毒污染的风险。 

PRRSV是一种正链RNA病毒，目前已发现两种基因型：欧洲型和美洲型。PRRSV基因组中有多个开放阅读框，其中第一个开放阅读框(ORF1a和ORF1b) 含有PRRSV基因组的80％的序列，其编码PRRSV病毒复制所必须的RNA复制酶(Straw et al，Diseases of Swine，9TH edition，chapter 24(2006))。ORF1a和ORF1b被翻译成一个多蛋白(poly-protein)，该多蛋白被其中含有的蛋白酶活性区域切割成多个非结构蛋白，包括Nsp1-Nsp12(见，例如，Vries et al，Seminars in Virology，8:33-47(1997)；Allende et al，Journal of General Virology，80:307-315(1999))。