[发明专利]一种鱼类持续激活生长激素受体基因及制备方法和用途

权利要求书

1.一种编码的蛋白质，其序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

2.一种分离的重组基因，其序列为SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

3.权利要求2所述的一种鱼类持续激活生长激素受体基因的制备方法，其步骤是：

A. 设计引物：扩增GHR信号肽的引物：

F: CAGATCGATCACCCGGGAGCCACCATGGCTTACTCTCTCTCGCTC

R: TTTCCGCCTTGATGCGCTCGGATCTTGCAGACACCAG；

扩增c-Jun拉链区的引物：

 F: CAAGATCCGAGCGCATCAAGGCGGAAAGGAAGAG

R: CTTGGTATCTGTGCCACTCTCAGGACTTTCTGTTTGAGTTG；

扩增GHR信号传递区的引物：

F: CCTGAGAGTGGCACAGATACCAAGCAAAG

R: GTTCTCGAGATTCATGGGTTCAGGTTTCCCAGAAG；

B. 对GHR信号肽，c-Jun亮氨酸拉链区，GHR跨膜区和胞内区，分别采取PCR扩增；

GHR信号肽扩增条件为：95°C预变性4 分钟；95°C变性30秒，66°C复性30秒，68°C延升30秒，13个循环; 68°C延升10分钟; 4°C保存；

c-Jun亮氨酸拉链区扩增条件为：95°C预变性4 分钟；95°C变性30秒，59°C复性30秒，68°C延升30秒，18个循环，68°C延升10分钟，4°C保存；

GHR跨膜区和胞内区扩增条件为：95°C预变性4 分钟；95°C变性30秒，63°C复性30秒，68°C延升90秒，20个循环，68°C延升10分钟，4°C保存；

C. 对扩增的三个基因片段，采取又一轮PCR扩增，获得持续激活的GHR重组基因片段；

     用连接PCR的方法将GHR信号肽，亮氨酸拉链区，GHR跨膜区和胞内区连接成一个新的分子片段，扩增条件为：95°C预变性4 分钟；95°C变性30秒，66-62°C，每个循环降0.5°C，复性30秒，68°C延升90秒，10个循环; 95°C变性30秒，63°C复性30秒，68°C延升90秒，10个循环； 68°C延升10分钟；4°C保存；

D. 将获得的重组基因克隆入表达载体pCA-AT，获得用于基因转移的重组基因载体pCA-SJG-A。

4.权利要求2所述的一种重组基因在斑马鱼中的应用。

5.权利要求2所述的一种重组基因在快速生长转基因鲤鱼中的应用。

6.权利要求2所述的一种重组基因在快速生长转基因团头鲂中的应用。

7.权利要求2所述的一种重组基因在快速生长转基因黄颡鱼中的应用。