[发明专利]一种使用人工染色体重组技术培育心血管系统荧光转换斑马鱼的方法有效
| 申请号： | 201110141405.3 | 申请日： | 2011-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN102250951A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 周勇;顾爱华;吉贵祥 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N1/21;A01K67/033 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 210029 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 使用 人工 染色体 重组 技术 培育 心血管 系统 荧光 转换 斑马 方法 | ||
1.一种使用人工染色体重组技术培育心血管系统荧光转换斑马鱼的方法，其特征在如下步骤实现：
A、flk BAC导入工程菌SW105，其中flk BAC为CH211-231B5；
B、采用目的片段5’引物 ：5’-CATACGAGTATCATTCGGGGTTATTTTAACAG ACAAAATTAATTCAGACGCGCAAGTTTGTACAAAAAAGAGGCT-3’ 和
目的片段3’引物 ：5’-ATAACACAAAAAGCGACACTTACCATGTGAAA TACAACGGCTAGTCTTTCCAGAGTAGTGAGGAG-3’ 扩增pPCRBloxYkanFrt中的荧光转换基因元件；
C、荧光转换基因元件的电击导入含flk-BAC感受态细胞，并大量培养；
D、清除插入基因片段所带筛选抗性；
E、引入Tol/ISceI转座位点提高整合效率：其中Tol/ISceI插入位点1引物:
上游引物：5‘-ACCCAATTCACCTGTAGCGCATGGACTAGAGATGAAGCTTGG TACCGAGCTCGGATCCACTAGTACGGC-3’
下游引物：5‘-GATCTGCAGCATATCATGCGTGTAATATGAGAGACGAGCTC GGATCCGAACAAACGACCC-3’
Tol/ISceI插入位点2引物:
上游引物：5‘-GGGCATCGGTGAGCTTGACATTGTAGGACTATATTGCTCG AGCGGCCG CCAGTGTGATGG-3’
下游引物：5‘-CTGTTCCTGCGCCCGAAGAGTCTTGTGGTAAGTTTGTGCAGG CGGCCGCATTCCC-3’；
F、斑马鱼胚胎的注射；
G、潜在的成功转基因鱼筛选。
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