[发明专利]新发现的丙型肝炎病毒抗原表位

说明书

技术领域

本发明涉及生物信息学和免疫学技术，预测了新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，初步的体内、体外实验证明这个抗原表位具有免疫原性。

背景技术

丙型肝炎病毒（HCV）是引起慢性肝病的主要病原体之一，全世界约有HCV感染者1.7 亿-2.0亿，我国人群HCV感染率约3.2%，估计全国感染者在4000 万以上。HCV感染后，约50% -85%转为慢性肝炎，其中20%-30%发展为肝硬化，部分转为肝细胞肝癌（HCC），严重危害人类健康，已成为全球性的、严峻的公共卫生问题。迄今为止，尚缺乏理想的抗病毒治疗措施，干扰素治疗也不太令人满意。由于HCV病毒变异率高，以保护性中和抗体为主的预防性HCV疫苗的研究步履维艰，因此，寻求抗HCV的疫苗和有效抗病毒药物一直是研究的热点。

HCV基因组有9.6kb，编码3010aa的多肽，由结构蛋白（Core、E1和E2）和7个非结构蛋白（p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）组成。HCV感染后，机体细胞模式识别受体（pattern  recognition receptors，PRR）感受外来分子的侵入，诱导细胞内信号转导，产生I类干扰素等固有免疫反应，以抵抗病毒的侵袭；同时通过DC介导特异性细胞免疫，清除病毒感染，恢复细胞的“健康状态”。对急性HCV 感染病人观察发现，如病人能早期出现针对包膜蛋白的抗体,则有利于病毒清除。早期疫苗研究中也证明了HCV 确实具有中和抗原表位,用真核载体表达的重组膜蛋白免疫黑猩猩,可以保护动物免受同株病毒的攻击。由于HCV中和抗原表位存在于编码包膜糖蛋白的E区，而HCV E区基因高度变异，尤其是E2区N端存在高变区（HRV1和HRV2），从而使机体产生的中和抗体因抗原变异而缺乏保护力，不能有效地清除病毒准种或其它型别病毒株的感染。

近年来, 应用更特异的ELISPOT法检测免疫活性细胞在特异性表位肽刺激下的细胞因子分泌,分别观察CD4+ Th细胞和CD8+ CTL细胞介导的免疫反应。动态观察发现，早期有强烈Th 免疫反应的病人,HCV病毒检查阴转,若Th 免疫反应下降,病毒血症又可复发,说明Th细胞免疫反应在病毒清除中的重要作用。最近有研究发现，HCV感染的患者若能在感染的早期产生较强的针对HCV各个蛋白的多表位特异性CTL，则患者的感染多表现为自限性；而当患者特异性CTL的活性较低或仅针对个别表位时，则可导致HCV感染的持续状态，并可造成肝组织的慢性损伤，提示CTL活性对HCV感染的控制具有重要作用。黑猩猩感染实验能更仔细地观察初次感染时不同时相的免疫反应，结果说明CD4+ T细胞和CD8+ T细胞均在HCV清除和维持病毒抑制状态中发挥重要作用。

由于HCV疫苗研究的必要性和迫切性,自1989 年HCV基因获得克隆以来,人们一直在致力于疫苗的研究,但是进展缓慢。早些时候，人们注重发展HCV包膜糖蛋白或多肽亚单位疫苗，同HIV 疫苗的研究一样，由于HCV包膜糖蛋白高度的变异特性，使以产生中和性抗体控制病毒感染和复制的研究遇到困难。HCV疫苗难以实现的主要原因归纳为以下三点: ① HCV基因组变异率较高，病毒准种多，缺乏保护性抗体，不能预防黑猩猩和人类再次感染，传统的预防性疫苗的研究遇到困难；② HCV复制能力差，感染力弱，使体内病毒滴度较低，在体外又不易培养,病毒复制感染过程及发病机制仍不清楚，而且HCV 编码的某些蛋白,如核心蛋白和NS蛋白还可能与HCV的致癌性有关,免疫原的选择以及强度均受到一定的限制；③ 缺乏理想的体外感染细胞模型,动物模型除黑猩猩外,其他动物,即使灵长类动物,如狒狒、恒河猴等都不能为HCV 所感染，限制了对疫苗评价的研究。近10年来，HCV疫苗研究的焦点主要集中在核酸疫苗、病毒载体疫苗、重组多表位疫苗以抗原递呈细胞为载体的DC疫苗等。