[发明专利]一种用于检测精脒/精胺N1-乙酰转移酶活性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说是涉及一种医药检测技术，更具体地说是涉及一种精脒/精胺N¹-乙酰转移酶(简称：SSAT)活性的方法，再具体地说是涉及一种通过检测SSAT底物的乙酰化代谢物来分析SSAT活性的方法，其中：SSAT底物是左旋多巴，左旋多巴的部分代谢是通过SSAT的诱导能够产生乙酰化代谢物N-乙酰基-L-多巴。

背景技术

(一)左旋多巴的研究概况

1、概述

3-羟基-L-酪氨酸/L-β-(3，4-二羟基苯)丙氨酸/L-3-(3，4-二羟基苯)丙氨酸/L-(3，4-二羟基苯)丙氨酸(Levodopa)，又称L-多巴(简称：L-Dopa，L-DOPA)，为酪氨酸的羟化物，在体内是左旋酪氨酸合成儿茶酚胺的中间产物。作为药品，通用名为左旋多巴，又名左多巴，商品名为息宁、Parcopa、Atamet、Stalevo、美多巴、Prolopa等。

附：左旋与右旋是指有机化合物的对映体对偏振光中分别使光向反时针或顺时针方向旋转。会令偏振光左旋或右旋的异构体会被称为左旋体和右旋体。在有机化学中，通常用(+)表示左旋，(-)表示右旋。如L-构型的左旋酒石酸，其全名可写作L(+)-酒石酸。

L-DOPA为抗震颤麻痹药，适用于原发性震颤麻痹症及非药原性震颤麻痹综合征。L-DOPA通过血脑屏障进入脑组织，发挥作用。L-DOPA服用后有恶心、呕吐、食欲不振及失眠、幻觉等不良反应。

2、理化性质

英文别名：3-(3，4-Dihydroxyphenyl)-L-alanine，L-3-(3，4-Dihydroxyphenyl)alanine

化学名称：3-羟基-L-酪氨酸

分子式：C₉H₁₁NO₄

分子量：197.19

CAS登录号：59-92-7

EINECS登录号：200-445-2

比旋光度-11.7&ordm；(c＝5.3，1N HCl)

熔点：295℃

3、药物分析

L-DOPA生产有化学合成、天然植物提取和微生物酶转化法三条主要途径，天然左旋多巴来源于豆科藜豆属植物龙爪藜豆Stizotobium ochinchinensis(Lour).Tang etWang的种子，也可以在哺乳动物体内和大脑中由L-酪氨酸合成。

(1)方法名称：左旋多巴原料药-左旋多巴的测定-非水滴定法。

应用范围：本方法采用滴定法测定左旋多巴原料药中左旋多巴的含量。

本方法适用于左旋多巴原料药。

方法原理：供试品加无水甲酸溶解后，加入冰醋酸摇匀，加结晶紫指示液2滴，用高氯酸滴定液滴定至溶液显绿色，并将滴定的结果用空白试验校正，根据滴定液使用量，计算左旋多巴的含量。

试剂：①冰醋酸，②无水甲酸，③高氯酸滴定液(0.1mol/L)，④结晶紫指示液，⑤基准邻苯二甲酸氢钾。

试样制备：

①高氯酸滴定液(0.1mol/L)

配制：取无水冰醋酸(按含水量计算，每1g水加醋酐5.22mL)750mL，加入高氯酸(70～72％)8.5mL，摇匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000mL，摇匀，放置24小时。若所测供试品易乙酰化，则须用水分测定法测定本液的含水量，再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01％～0.2％。

标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。

②结晶紫指示液

取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解。

操作步骤：精密称取供试品约0.1g，加无水甲酸2mL使溶解，加冰醋酸20mL摇匀，加结晶紫指示液2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于19.72mg的C9H11NO4。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。