[发明专利]尖尾芋及其提取物在制备宫颈癌药物中的运用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切地说它是抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法。

背景技术

尖尾芋（Alocasia eucullatta (Dour) Schott）为天南星科植物假海芋的根茎，生于山涧阴湿处，或树旁沟边、河边。分布于广东、广西、四川等地。该植物能清热、解毒、活血、消肿，治疔疮、痈肿、丹毒，跌打损伤，慢性气管炎、钩端螺旋体病等疾病。迄今为止，对尖尾芋的研究很少，多见于一般药效学报道。有关尖尾芋的抗癌药理活性很少报道，仅见侯学文从中分离得到一个凝集素，其对肺腺癌细胞株P18仅有很少杀伤能力。癌症是当今社会发病率高、死亡率高的一种顽痰，目前尚无治愈率较高的药物的报道。本发明人在寻找中草药抗癌活性成分过程中，发现尖尾芋提取物具有很好的抗肿瘤活性，并且从中获得多个具有抗癌活性的二苯乙烯、二苯乙烯苷、脑苷类化合物等多种骨架类型的化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法，其工艺简单实用，为尖尾芋的应用提供了广泛的途径。本发明的目的是通过如下方案实现的：以尖尾芋（Alocasia eucullatta (Dour) Schott）为原料，采用溶剂提取法、溶剂萃取法等工艺中的一种或者多种工艺，并结舍浓缩干燥、冷冻干燥，喷雾干燥等常用干燥方法制备成尖尾芋总提取物，将制成的尖尾芋总提取物作为抗癌活性成分用于治疗多种癌症。本发明的优点是：尖尾芋及其提取物工艺简单实用，抗癌疗效好，并且无毒副作用，为尖尾芋应用提供了广泛的途径。

具体实施方式

1．溶剂提取法／溶剂萃取法全用提取制备尖尾芋提取物

1.2kg用50％乙醇在90℃下回流，合并提取液，浓缩得到130g乙醇提取物。

2．溶剂提取法／树脂吸附法合用提取制备尖尾芋提取物

尖尾芋1.0kg用80％乙醇在90℃下回流，合并提取液，浓缩得到l30g乙醇提取物。乙醇提取物上D-10l型吸附树脂柱，先用水、5％乙醇／水洗脱以除去色素和杂质，而后用60％乙醇／水洗脱。其中60％乙醇／水洗脱部分减压浓缩除乙醇，再经冷冻干燥可得到尖尾芋提取物，收率为1.0％。

3. 尖尾芋提取物的体外抑瘤实验

3.1 细胞株、试剂及仪器

人宫颈癌Hela细胞株购自中科院细胞库；DMEM培养液，Gibco产品；胎牛血清，Gibco产品；胰蛋白酶，Gibco产品；DMSO溶液，sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000培养箱，Thermo公司；Multishkan MK3酶标仪，Thermo公司。

3.2 肿瘤细胞培养方法

人宫颈癌Hela细胞株用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养，培养条件为37℃，5％CO₂浓度及饱和湿度。当细胞生长至对数生长期时，用25%胰酶消化细胞，洗涤吹散细胞稀释至10⁶/ml，每孔100μL接种于96孔板，以备MTT实验。

3.3 细胞增殖实验（MTT法）

尖尾芋提取物溶于DMSO溶液，取含1‰DMSO的尖尾芋提取物溶液，用含10%胎牛血清的DMEM溶液配成浓度分别为100、50、20、2μg/mL的尖尾芋提取物溶液，每孔100μL接种于96孔板，混匀，使尖尾芋提取物每孔终浓度分别达到50、25、10、1μg/mL，放入培养箱继续培养16、32、48h。每孔加入5mg/mLMTT溶液5μL，继续培养5h，测定各孔吸光度。以不加任何处理的培养细胞为空白对照，以单用培养细胞作为阴性对照。每个浓度梯度均设置12个平行组，分别计算细胞抑制率。按照以下公式计算抑制率：

抑制率=1-（实验组吸光度平均值/对照组吸光度平均值）×100％

结果见表1

表1 尖尾芋提取物对Hela细胞体外增殖的抑制作用

t检验，*p<0.05，**p<0.01

结果表明：不同浓度，不同培养时间的尖尾芋提取物可显著抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，提示其可能有一定的抗癌效果。