[发明专利]脑蛋白水解物片的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂的检测方法，具体涉及脑蛋白水解物片的检测方法。

背景技术

脑蛋白水解物片为从健康猪新鲜大脑组织中提取的一种活性肽类水解物，含有多种氨基酸及脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等。在临床上广泛用于改善失眠、头痛、记忆力下降、头晕及烦躁等症状，可促进脑外伤后遗症、脑血管疾病后遗症、脑炎后遗症、急性脑梗塞和急性脑外伤的康复。药理实验结果显示，脑蛋白水解物为一种大脑所特有的肽能神经营养物质。能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。脑蛋白水解物可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，激活腺苷酸环化酶和催化其它激素系统。提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。脑蛋白水解物片现行的质量标准收载于《中国国家药品标准》第十六册(WS₁-XG-131-2002)，药品规格为6.5mg(按氨基氮计算)：14.4mg(按总氮计算)。在该标准中，仅有2项显色反应作为鉴别反应，并只采用滴定法对产品的总氮、氨基氮含量进行控制，该方法专属性与有效性都较差。脑蛋白水解物的主要成分为小分子肽类和氨基酸，动物实验显示，脑蛋白水解物类药物可显著增强大鼠对缺氧的耐受能力，而同质的多种氨基酸混和物则无此作用。药理试验文献报道，脑蛋白水解物对于神经细胞作用与神经生长因子(NGF)相似，但不同的是，NGF为巨分子肽，而脑蛋白水解物是小分子肽，且能通过血脑屏障。脑蛋白水解物中有些肽作为神经营养因子，另一些则可能直接增加星形胶质细胞的NGF产量，或者通过调节肾上腺素神经输入到调节NGF代谢的重要靶细胞，有些还能与神经或激素相互作用，导致神经的代谢变化。(文献出处：脑蛋白水解物类药物中活性成分的比较分析，东北林业大学，李想，7-8.)，另一项药理试验结果显示，从猪脑蛋白水解物中分离出5种小分子肽组份，并采用东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍模型，通过小鼠被动回避跳台试验测定组份的生物活性，结果显示，组份A4、A5具有明显的生物活性，能显著改善记忆获得障碍小鼠的学习记忆能力。(文献出处：猪脑蛋白水解物中小分子肽的制备及生物活性测定，张惠敏、王娅莉、耿亚鹏，河北医药，2006，28(3)：223-224.)。故脑蛋白水解物具有生物活性及药效作用的为小分子肽类。但目前现行的质量标准中，只对游离氨基酸(氨基氮)进行控制，并未对小分子肽类的含量进行控制，因此，缺乏对脑蛋白水解物片药效及产品质量控制的科学的方法及指标。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，根据脑蛋白水解物片各组分的特性，尤其是对于发挥主要药理药效作用的小分子肽类，研究设计脑蛋白水解物片的检测方法。

本发明通过分子排阻色谱法对小分子肽类进行了鉴别，并采用氨基酸分析方法来测定本品的多肽含量。通过对样品进行完全的酸水解，测定脑蛋白水解物片中的氨基酸总量，并对脑蛋白水解物片中所含游离氨基酸进行含量测定，通过水解后氨基酸总量减去样品中游离的氨基酸含量，准确的计算脑蛋白水解物片中的多肽含量，制定出针对小分子肽类的合理的质量控制指标。提高了产品质量可控性，使制剂各组分达到有效剂量范围，从而保证疗效。

本发明提供了一种脑蛋白水解物片的检测方法。

本发明的脑蛋白水解物片的检测方法包括下列步骤：