[发明专利]冻融脱细胞激光微孔辐照异种真皮基质制备方法及其产品

说明书

技术领域

本发明属于脱细胞异种皮基质及其制备方法领域。

背景技术

“微粒皮+大张异体皮”技术是目前国内修复覆盖大面积深度烧伤患者创面常用的有效手段，该技术可有效的利用患者的残留皮肤，结合异体皮移植暂时覆盖了大面积深度烧伤切痴后的创面，解决了皮源匾乏的难题。但由于真皮组织的扩展不能同步于表皮上皮化的形成，缺乏真皮组织，皮肤愈合质量难以达到功能和外观的要求，患者创面愈合后瘫痕挛缩严重，皮肤弹性差，瘫痕增生、痛痒等，影响外观功能，究其原因与真皮成分的缺乏有关。利用脱细胞异种(猪)真皮做真皮替代物，与自体微粒皮加异体皮覆盖深度烧伤切削痴后的创面，较好的解决了上述难题。

用于烧伤创面治疗的有各种生物材料，如异体皮、异种皮、各种生物膜及合成的胶原纤维膜，存在的问题是有排异反应，可能携带潜在的病原体；而异体皮来源又非常困难，各种合成的材料价格昂贵，临床应用受到限制。大面积烧伤病人因自体皮的缺乏，即使创面能修复，因缺乏自体真皮层，会遗留严重瘢痕。国外Lifecell公司及国内杰雅公司研制的脱细胞异体真皮已商品化，其昂贵的价格和来源有限在临床使用受限，因此寻求能植入人体内，组织相容好，免疫性低的用于烧伤、整形美容及作为组织填充物的异种真皮是目前国内外研究的热点。因猪皮最接近人体皮肤，来源广，价格低，是普遍研究的材料。

以往的脱细胞方法主要有酶消化法和化学去污剂法等，这些方法极易造成真皮三维结构的破坏，使真皮的物理性能下降，并且难以彻底去除细胞碎片；利用戊二醛来增加真皮韧性，会导致胶原变性结构的破坏，增加真皮支架的细胞毒性，也会抑制正常细胞的生长。

发明内容

本发明旨在克服现有技术存在的问题，提供一种冻融脱细胞激光微孔辐照异种皮制备方法及其产品。

冻融脱细胞激光微孔辐照异种真皮基质制备方法，其特征在于，取小猪皮切取皮片，拉皮；激光打孔；采用缓冲液清洗；冻融，加入足够浸没上述皮片量的上述缓冲液超声波震荡，用以去除已被破坏死亡细胞及细胞碎片保持异种真皮中结构和基地膜的完整性；用纯化水清洗，加入每平方厘米小于或等于0.12毫克的磺胺嘧啶锌，在摄氏负20度冷冻；密封后消毒灭菌。

由上述方法得到的冻融脱细胞激光微孔辐照异种真皮基质，其特征在于，厚0.3-0.4mm，孔距1.0-2.0mm，孔径500-808um。

我们采用先激光打微孔，再反复冻融+缓冲液清洗+超声振荡，再加磺胺嘧啶锌，最后钴60照射制备的异种脱细胞真皮避免了采用其他方法制备脱细胞真皮的不足，脱细胞彻底，胶原结构完整，物理性能接近新鲜人皮，免疫抗原性低，其锌离子可促使人体细胞生长，并具有抗感染作用，有望应用于临床。

利用本发明冻融脱细胞激光微孔辐照异种真皮做真皮替代物，与自体微粒皮加异体皮覆盖深度烧伤切削痴后的创面，较好的解决了上述难题，经动物实验与临床应用发现该技术可明显改善深度烧伤创面的愈合质量；能达到无菌无排斥拉伸强度亲水性符合人体需要做的永久性真皮支架保存在体内。本发明产品色白、柔韧、弹性好；抗拉强度、应力-应变、蠕变性能接近人体皮肤；亲水性好，含水量能达到60％，符合人体皮肤特征。

具体实施方式

冻融脱细胞激光微孔辐照异种真皮基质制备方法，其特征在于，取小猪皮切取皮片，拉皮；激光打孔；采用缓冲液清洗；冻融，加入足够浸没上述皮片量的上述缓冲液超声波震荡，用以去除已被破坏死亡细胞及细胞碎片保持异种真皮中结构和基地膜的完整性；用纯化水清洗，加入每平方厘米小于或等于0.12毫克的磺胺嘧啶锌，在摄氏负20度冷冻；密封后消毒灭菌。

所述的拉皮是在4mPa，10mm/min拉伸速度下拉伸皮片。

所述的激光打孔是采用CO₂激光器，以输出功率30W，波长10600mm输出方式，连续激光打孔。

所述的冻融是将打孔后的猪皮放入负75度的冰箱内6小时，取出，摄氏37°下放置50分钟，反复3-8次。

所述的缓冲液是由NaCL8.00g+KCL 0.20g+KH₂PO₄ 0.20g+Na₂HPO₄3.49g+1000mL蒸馏水配置而成。

所述的超声震荡时间是30-50小时。

为了更好地保持异种皮中胶原的结构和基地膜的完整性，所述的加入上述缓冲液超声波震荡过程是换上述缓冲液1-6次超声振荡；每次20分钟。

所述的用纯化水清洗次数为3～5次。