[发明专利]一种柯萨奇病毒A16型（CA16）IgM抗体检测试纸条

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种柯萨奇病毒A16型(CA16)IgM抗体检测试纸条及其应用。

背景技术

柯萨奇病毒(Coxsackievirus)是一种人类疾病严重的致病病原，其感染可以导致许多疾病，从较轻的呼吸道感染疾病，到比较严重的心肌炎、心包炎及神经系统的一些疾病，甚至可以引起婴幼儿死亡。CoxV可分A、B两组：A组病毒有24个血清型，B组有6个血清型。B组所有型别和A组第9型有共同组特异性抗原；B组各型病毒血清型之间有交叉反应，而A组没有。感染人体的CoxV以A组居多，引起手足口病的CoxV多以A16型、A4型、A5型、A7型、A10型、B2型、B5型、B13型为主。CoxV为单股正链RNA病毒，分子量为(2～2.8)×106，呈球形，直径20-30nm，无包膜，含有由32个壳微粒形成的二十面体立体对称的衣壳；耐低温，对乙醚、乙醇、来苏尔等消毒液敏感，对热、干燥、紫外线等也较敏感。

柯萨奇病毒是单股正链RNA病毒，病毒颗粒呈球形，为二十面体立体对称，无包膜。基因组全长为7389～7402个核苷酸，不包括3’端的多聚腺苷酸尾。在柯萨奇病毒基因组的5’端，以共价键结合了一个小的蛋白质，称为毒粒蛋白，叉称VPg；而在3’末端有一个多聚腺苷酸尾，其由几十个到近百个腺苷酸连结而成。柯萨奇病毒RNA基因组的顺序依次为5’端非编码区，P1区、P2区、P3区和一段3’端非编码区(图1)。病毒外壳由结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4构成，其中VP1、VP2、VP3裸露于病毒外壳表面，VP4隐藏于病毒外壳内面。

Cox A16的基因组长约7400bp，包括5′及3′端的非编码区和中间一个大的开放读码框(ORF)，依次由VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D 11个基因组成，主要编码产生病毒结构蛋白和病毒复制所需要的酶类。其中VP1区长891bp，编码含297个氨基酸的VP1蛋白。VP1是病毒主要的中和抗原决定簇所在的部位，是肠道病毒血清型的分型依据。VP1区的核苷酸序列也是肠道病毒基因分型的依据。

通过基因工程获得该抗原的表达蛋白，并用其作为抗原检测CA16的特异性IgM抗体。

目前，手足口病的诊断，除了依据临床症状外，实验室诊断是不可缺如的环节。实验室的诊断标准如下：

1)血液检查的细胞总数一般正常或偏高，分类时淋巴细胞较高，中性粒细胞较低。2)有中枢神经系统并发症时，脑脊液细胞数可增多，蛋白升高。3)发病后从粪便、咽喉漱口液分离或检测到相关病毒。4)从脑脊液或疱疹液分离或检测到相关病毒。5)从早期血清中检测出相关病毒IgM抗体。6)恢复期血清中和抗体比急性期有≥4倍的增长。

然而到目前为止，还没有一种能够方便、快捷检测CA16特异性IgM抗体的试纸条的报道。

发明内容

(一)、要解决的技术问题

发明的目的是提供一种使用方便、快捷，用于检测CA16特异性IgM抗体的试纸条，检测感染患者标本中CA16特异性IgM抗体，用于人CA16感染的辅助诊断。

(二)、技术方案

本发明提供了一种检测试纸条，它包含以下成分：

(1)包被CA16病毒抗原VP1和二抗IgG两个条带的反应膜；

(2)含有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体的结合物释放垫。

上述二抗可以是抗鼠IgG二抗，所述反应膜可以是硝酸纤维素膜，所述结合物释放垫可以是玻璃纤维膜。

本发明还提供制备上述试纸条的方法，其包括如下步骤：

1)将CA16病毒抗原VP1以及二抗IgG在反应膜上分别形成检测带和质控带，备用；

2)用胶体金标记抗人IgM单克隆抗体，包被到结合物释放垫中；

3)将制备好的反应膜以及结合物释放垫与样本垫、吸水垫和反应支持物组装成试纸条。

本发明还公开了所述试纸条在检测CA16特异性IgM抗体的应用。

本发明通过采用高纯度的纯化的CA16基因工程抗原VP1和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体，应用膜层析捕获法的原理检测人标本中的CA16特异性IgM抗体。

(三)、有益效果