[发明专利]赖氨酸的三级发酵及其包被制品

权利要求书

1.发酵制备L-赖氨酸制品的方法，其包括：

(1)将产L-赖氨酸的工程菌接入第一发酵罐于30-33℃培养8-12小时；

(2)将步骤(1)获得的培养液以3-7％(体积)的接种量接种于第二发酵罐，于36-40℃培养8-12小时；

(3)将步骤(2)获得的培养液以10-20％(体积)的接种量接种于第三发酵罐，于36-40℃培养1-5小时；

(4)向第三发酵罐持续流加糖，其中糖的每小时流加量为第三发酵罐内培养液量的0.2-0.35％(重量)，进行10-18小时；

(5)向第三发酵罐持续流加糖和氮源，其中糖的每小时流加量为第三发酵罐内培养液量的0.3-0.5％(重量)，而且氮源的每小时流加量为第三发酵罐内培养液量的0.1-0.25％(重量)，进行30-65小时，优选50-55小时；

(6)将步骤(5)获得的培养液进行依次进行膜分离并对滤液进行喷雾干燥；

(7)对步骤(6)获得的颗粒进行筛分，收集粒径小于0.5mm的颗粒；和

(8)将步骤(7)获得的颗粒用脂肪包被。

2.权利要求1所述的方法，其中步骤(8)中，步骤(7)获得的颗粒和脂肪的重量比为3-7∶7-3，优选为4.5-6.5∶5.5-3.5，更优选为5.5-6∶4.5-4。

3.权利要求1所述的方法，其中步骤(8)中，脂肪优选是分馏棕榈脂肪，更优选是百佳能，最优选是百佳能HTL316。

4.权利要求1所述的方法，其中第一发酵罐和第二发酵罐中的培养基配方为：每18立方米培养基中含，葡萄糖500-750公斤，甘蔗糖蜜50-300公斤，玉米浆400-600公斤，KH₂PO₄ 30-80公斤，MgSO₄·7H₂O 3-15公斤，FeSO₄·7H₂O 0.1-1公斤，MnSO₄·7H₂O 0.1-1公斤，生物素5-30克，和叶酸3-10克，优选第一发酵罐和第二发酵罐中的培养基配方为：每18立方米培养基中含，葡萄糖600公斤，甘蔗糖蜜200公斤，玉米浆520公斤，KH₂PO₄ 45公斤，MgSO₄·7H₂O 7公斤，FeSO₄·7H₂O 0.5公斤，MnSO₄·7H₂O 0.5公斤，生物素12克，和叶酸5克。

5.权利要求1所述的方法，其中第三发酵罐的培养基配方为：每300立方米培养基中含，蔗糖10000-15000公斤，玉米浆10000-15000公斤，KH₂PO₄ 700-1200公斤，MgSO₄·7H₂O 5-220公斤，FeSO₄·7H₂O 5-25公斤，MnSO₄·7H₂O 5-220公斤，生物素150-300克，和叶酸50-120克，优选第三发酵罐的培养基配方为：每300立方米培养基中含，蔗糖12000公斤，玉米浆12000公斤，KH₂PO₄ 1000公斤，MgSO₄·7H₂O 100公斤，FeSO₄·7H₂O 12公斤，MnSO₄·7H₂O 120公斤，生物素200克，和叶酸85克。

6.权利要求1所述的方法，其中步骤(4)和(5)中的温度与步骤(3)中的温度相同，优选为38-39℃。

7.权利要求1所述的方法，其中步骤(4)和(5)中的糖是蔗糖；和/或，其中步骤(5)中的氮源是无机氮源，优选是硫酸铵或氯化铵。

8.权利要求1所述的方法，其中工程菌是表达二氢吡啶二羧酸合成酶变体的棒状杆菌，其中所述二氢吡啶二羧酸合成酶变体相对于野生型二氢吡啶二羧酸合成酶的活性提高。