[发明专利]重组MSG1蛋白单克隆抗体及检测猪嗜血支原体特异性抗体的阻断ELISA方法

权利要求书

1.一株分泌猪嗜血支原体重组MSG1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A7，其特征在于保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.4860，保藏日为2011年5月13日。

2.猪嗜血支原体重组MSG1蛋白的单克隆抗体anti-MSG1-1A7，其特征在于该单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.4860的杂交瘤细胞株分泌。

3.权利要求2所述的单克隆抗体在制备猪嗜血支原体MSG1蛋白检测试剂中的应用。

4.一种检测猪嗜血支原体特异性抗体的阻断ELISA方法，其特征在于将权利要求2所述的猪嗜血支原体重组MSG1蛋白的单克隆抗体anti-MSG1-1A7进行HRP标记作为酶标单体HRP-MAb，并且判断标准如下：当阻断率≤23.71％时判为血清抗体阳性反应，PI≥36.35％时判为血清抗体阴性反应，23.71％＜PI＜36.36％时判为可疑，需重复检测1次，如果仍低于36.35％则判为血清抗体阴性反应，所述的阻断率按照如下公式计算：

阻断率＝(阴性血清OD450nm值-被检血清OD450nm值)/阴性血清OD450nm值×100％。

5.根据权利要求4所述的检测猪嗜血支原体特异性抗体的阻断ELISA方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)在酶标板上每孔加入终浓度为0.5μg/ml的重组MSG1蛋白，4℃包被过夜，PBST洗板；

(2)加入含5％脱脂乳的PBST，200μL/孔，37℃2h封闭，PBST洗板；

(3)加入1∶1稀释的待检血清样品，100μL/孔，设标准阴性血清对照和标准阳性血清对照，37℃1h，PBST洗板；

(4)加入1∶10000稀释的酶标单抗HRP-MAb，100μL/孔，37℃1h，PBST洗板；

(5)加入TMB底物溶液，100μL/孔，37℃10min。加入2mol/L的H₂SO₄ 50μL/孔终止反应，用酶标仪读取各孔OD450nm值，计算阻断率，进行结果判断：

阻断率＝(阴性血清OD450nm值-被检血清OD450nm值)/阴性血清OD450nm值×100％，

判断标准如下：当阻断率≤23.71％时判为血清抗体阳性反应，PI≥36.35％时判为血清抗体阴性反应，23.71％＜PI＜36.36％时判为可疑，需重复检测1次，如果仍低于36.35％则判为血清抗体阴性反应。

6.根据权利要求5所述的检测猪嗜血支原体特异性抗体的阻断ELISA方法，其特征在于所述的重组MSG1蛋白序列为SEQ ID NO.1。