[发明专利]一种基于创伤弧菌菌体抗体的创伤弧菌快速检测试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种病菌的快速检测试纸，特别涉及一种基于创伤弧菌菌体抗体的创伤弧菌快速检测试纸。

背景技术

创伤弧菌是海洋和盐湖中广泛分布的一种嗜盐性病原菌，可通过创口及消化道感染，易致蜂窝织炎和脓毒血症，病死率高达50%以上。

经典的创伤弧菌检测方法是培养法及生化实验方法，耗时长且需要的条件较多，无法实现创伤弧菌的快速检测。

CN101403004公开了创伤弧菌基因快速诊断试剂盒及其检测方法，试剂盒由两对引物、DNA聚合酶、稳定液、反应液、样品预处理液、显色液和阳性对照液组成，以上七种液体分别置于容器中。该基因快速诊断试剂盒应用六个区段，四条引物，根据是否扩增就能判断靶标物质的存在与否。这种方法虽然准确，但是操作较为复杂，检测成本高。

CN101818200A公开了创伤弧菌核酸定量检测试纸条，通过设计。引物及探针结合位点的靶基因为创伤弧菌溶细胞素结构基因vvhA350位～800位来确定是否存在创伤弧菌。这种方法虽然灵敏度高，安全可靠，但是同样存在组成复杂，成本较高的不足。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于创伤弧菌菌体抗体的创伤弧菌快速检测试纸。

本发明所采取的技术方案是：

一种创伤弧菌快速检测试纸，包括有底板、吸水垫、硝酸纤维素膜、金标抗体结合物膜和样品垫，硝酸纤维素膜上固定有抗创伤弧菌抗体和可与该抗体反应的IgG；金标抗体结合物膜上固定有胶体金-抗创伤弧菌抗体复合物。

其制备方法包括以下步骤：

1)  使用创伤弧菌免疫动物，制得抗创伤弧菌多克隆抗体，纯化得到抗创伤弧菌抗体；

2)  将纯化得到抗创伤弧菌抗体和可与该抗体反应的IgG分别滴于硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和质控线，封闭、烘干，得到固定有抗创伤弧菌抗体和可与该抗体反应的IgG的硝酸纤维素膜。

本发明的试纸，制备工艺简单，成本低廉，使用方便，可靠性高，可快速准确地检测出创伤弧菌。

附图说明

图1是本发明试纸的检测结果图；

图2是本发明试纸的不同菌浓度检测结果图；

图3是不同浓度创伤弧菌胶体金免疫层析试纸条检测线及质控线PU值；

图4是创伤弧菌免疫层析试纸条特异性检测结果图。

具体实施方式

下面结合实施例，进一步说明本发明。

多克隆抗体的制备：

使用创伤弧菌免疫新西兰大白兔获得兔抗创伤弧菌多克隆抗体，采用辛酸-硫酸铵法纯化兔血清蛋白，BCA法检测蛋白浓度，间接ELISA方法测定效价为1:12800），-20℃保存；

金标抗体结合物膜的制备：

采用柠檬酸三钠盐还原法，制备粒径为13 nm胶体金颗粒，将胶体金与纯化得到的多克隆抗体复合得到胶体金-抗体复合物；

使用得到的胶体金-抗体复合物浸泡金标垫，干燥得到金标抗体结合物膜；

含抗体的硝酸纤维素膜的制备：

用兔抗创伤弧菌多克隆抗体和羊抗兔IgG分别点样于硝酸纤维素膜上，作为检测线和质控线，封闭并烘干，得到含抗体的硝酸纤维素膜；

在塑料底板上分别将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标抗体结合物膜和样品垫依次组装，切割成为4mm宽的条带，得到试纸。

试纸条检测结果判定：

将试纸条插入样品悬液中，待样品层析完毕后观察检测结果。在测试条反应区中，检测线及质控线处各出现一条红带，则表示待检样品中有创伤弧菌，判为阳性；若仅在质控线处出现一条红带，则判为阴性；若质控线不出现红带，则表示测试条失效。

将试纸条插入样品溶液，20~30 min内可见质控线呈红色条带；检测线上阳性对照呈红色条带，阴性对照不显色，阳性样品呈红色条带，如图1所示，图中，1: 阴性对照；2: 阳性对照；3: 样品1（+）；4: 样品2（-）；C: 质控线；T:检测线。

试纸条敏感性检测：