[发明专利]细胞松弛素类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域：

本发明涉及用黄炳曲霉ZHN1-09(Aspergillus flavipes ZHN1-09)((2011年3月24日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC M 2011069)生产细胞松弛素类化合物的方法；本发明还涉及该类化合物在制备细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂中的用途。 

背景技术：

细胞松弛素是由真菌生产的一种结构和活性相关的次级代谢产物，科学家们发现这类化合物对细胞有许多不同寻常和有趣的作用。本发明人研究得知，黄炳曲霉ZHN1-09(Aspergillus flavipes ZHN1-09)(保藏编号是：CCTCC M 2011069)液体发酵产物经超声破碎后的粗提物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行了研究。研究发现所示化合物具有抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此有关的药物。 

发明内容：

本发明旨在提供一个具有抑制肿瘤细胞增殖，具有抗肿瘤活性的新化合物。其结构式为 

其结构特征是：该化合物是新的环状的细胞松弛素。 

本发明的化合物可通过微生物发酵培养来获取富含细胞松弛素类化合物的发酵物，然后从发酵物中采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、RP-18反相硅胶柱层析和半制备HPLC等方法分离纯化得到。 

本发明的下述实施例中列举了利用黄炳曲霉ZHN1-09(Aspergillus flavipes ZHN1-09)(保藏编号是：CCTCC M 2011069)制备本发明化合物的实例。 

具体实施方式：

在如下的实施例中所指的化合物的化学结构(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)是： 

实施例1该化合物的发酵生产及分离精制 

1发酵生产 

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取黄炳曲霉ZHN1-09(Aspergillus flavipesZHN1-09)(保藏编号是：CCTCC M 2011069)适量，接种到PDA固体斜面培养基上，在28摄氏度培养箱中培养6天。 

取斜面培养6天的黄炳曲霉ZHN1-09(Aspergillus flavipes)适量，接种到装有300mL培养液[培养基组成(克/升)：葡萄糖10.0，麦芽糖20.0，甘露醇20.0，味精10.0，KH₂PO₄ 0.5，MgSO₄ 0.3，酵母膏3.0，玉米粉0.3，pH＝6.5]的1000mL锥型瓶中，在28℃静置培养40天，获得菌丝体和发酵液。 

2浸膏的获得 

用纱布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液等体积乙酸乙酯萃取三次，萃取液减压浓缩至干；菌体破碎，用80％丙酮萃取3次，减压浓缩至不含丙酮，剩余水层用等体积乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩至干；合并菌体和发酵液的萃取物，得粗浸膏，共3.4克。 

3化合物的分离精制 

浸膏用氯仿-甲醇混合溶剂溶解后，加100-200目硅胶(青岛海洋化工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-丙酮，氯仿，氯仿-甲醇为溶剂进行梯度洗脱，分为4个馏分(Fr-1、Fr-2、Fr-3和Fr-4)。Fr-2(氯仿-甲醇20∶1洗脱物)，先后以氯仿-甲醇(1∶1)为溶剂进行LH-20柱层析，再经RP-18反相硅胶柱层析以甲醇∶水(40∶60)为溶剂进行洗脱，最后经半制备反相高效液相色谱制备(甲醇∶水＝70∶30)得该化合物。 

化合物白色无定形固体，[α]²⁵_D＝-5.5(c 0.1，MeOH)，分子式C₂₈H₃₃NO₆，HR-ESI-MS m/z：480.2379[M+H]⁺，计算值480.2386。IR v_maxcm^-1(KBr)：3420，2925，2866，1741，1716，1702，1459，1078，665，573。¹H和¹³C-NMR数据见表1。 

表1化合物的¹H(600MHz)和¹³C(150MHz)在CDCl3中的NMR数据^a