[发明专利]一种检测低密度脂蛋白胆固醇的方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及一种检测低密度脂蛋白胆固醇的方法和试剂盒。

背景技术

胆固醇是人体不可缺少的重要物质，它不仅参与形成质膜，而且还是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料。在正常血液中，胆固醇主要与低密度脂蛋白(LDL)结合以脂蛋白形式在血液中运转，所结合的胆固醇称为低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，当细胞需要利用胆固醇合成质膜等物质时，细胞制造出LDL受体蛋白，并把它安装到质膜上。LDL与细胞表面受体结合后与溶酶体融合，将LDL上的胆固醇水解下来，用于质膜等物质合成。

随着生活水平的提高，人们的饮食趋于精致化，常常不自觉地摄取过量的、高于人体细胞需求的胆固醇，这使得LDL在血液中的浓度不断升高。而高浓度的LDL易被氧化成ox-LDL，然后被巨噬细胞吞噬，由于LDL上结合有胆固醇，所以会形成泡沫细胞沉积在动脉壁上，造成动脉粥样硬化，最终引发心脑血管疾病。有研究表明，血液中LDL-C浓度每升高1％，患心脑血管疾病的风险增加2-3％。因此，检测血液中LDL-C浓度对预防和治疗心脑血管疾病具有重要意义。

目前，为了适应于全自动生化分析仪的普遍应用，出现了许多检测LDL-C的方法。如抑制法，它的反应原理是采用一种表面活性剂，使高密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇和乳糜微粒受到抑制，使其结合的胆固醇不水解，而LDL-C结合的胆固醇水解下来，接着通过胆固醇氧化酶、过氧化物酶生成醌型有色化合物，然后检测吸光度计算LDL-C的浓度。还有一种是利用两种表面活性剂对高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇和乳糜微粒的亲和力不同建立的消除法，它的反应原理是多聚阴离子与低密度脂蛋白胆固醇和表面活性剂I结合，在缺乏偶联剂时不与胆固醇反应，而高密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇和乳糜微粒反应生成过氧化氢被消除，加入表面活性剂II使低密度脂蛋白胆固醇水解出胆固醇，这时整个反应体系中产物为低密度脂蛋白胆固醇，通过胆固醇显色程度测定低密度脂蛋白胆固醇含量。但是，上述方法中所提及的表面活性剂均未公开，并且同时需要精密的全自动生化仪进行严格操作，这就使其在检测LDL-C中不能被广泛应用。

为了能够使检测方法广泛应用，特别是能够在一些基层医疗单位应用，现有技术利用沉淀剂与低密度脂蛋白反应生成悬浊液，然后检测吸光度，由于反应产生的悬浊液吸光度与低密度脂蛋白胆固醇的浓度呈正比，所以通过比浊法计算就可以得到检测结果。然而，这种沉淀剂法需要将血样中干扰检测的球蛋白、高密度脂蛋白等物质除去，使检测步骤繁琐、复杂，不利于快速检测。同时，沉淀剂法在准确度上略低于抑制法和消除法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测低密度脂蛋白胆固醇的方法和试剂盒，使得该方法和试剂盒能够不用除去血样中干扰物质就能检测，并且获得较高准确度。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测低密度脂蛋白胆固醇的方法，将磷钨酸与琼脂胶组成pH值为6.1-6.2的混合液，待测样品在镁离子的作用下与混合液和聚乙二醇20000混合，得到悬浊液，然后在630nm波长下检测吸光度，与经上述相同处理的标准溶液比浊，计算待测样品的低密度脂蛋白胆固醇浓度。

其中，样品低密度脂蛋白胆固醇浓度(mmol/L)＝标准溶液浓度×A_样/A_标，所述待测样品、混合液和聚乙二醇20000的体积比为1∶48∶12。

本发明所述混合液中琼脂胶的浓度为0.2-0.4g/L，所述混合液中磷钨酸的浓度为4-5g/L，所述镁离子浓度为2-4g/L，优选采用氯化镁溶液，所述聚乙二醇20000浓度为6-10g/L。