[发明专利]傅立叶红外光谱检测血清中核酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于检测方法，具体涉及用傅立叶红外光谱检测血清中核酸含量的方法。

背景技术

在发生病变的组织细胞中会发生代谢和组成结构的改变，从而引起代谢产物以及微观环境改变，主要体现在氧化还原性、化学键位置、温度、极性和离子浓度等参数的变化。由于血液中细胞的代谢产物会脱落到血清之中，因此会改变血清的成分变化，影响到血清的物质构成和含量。血清中分子的结构是确定的，且其结构变换可以通过分子振动反映在红外光谱中，因此，红外光谱技术是从物质的分子振动光谱来识别和区分不同的物质结构的，成为研究物质分子结构的有效手段。通常情况下，利用FTIR高分辨手段，对不同的组织进行了分析并能在分子水平上揭示不同组织核酸含量的差别，对于这些差别的鉴定方法，也就是通过红外的谱峰归属后的核酸官能团的变化加以区别。该方法对同一块组织的光谱采集部位不同，得到的光谱也有所不同，难以实现光谱的重现性。在此情况下，我们用血清能够反映突变组织的变化，还能获得清晰的红外光谱。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的缺陷，提供一种快速、准确、操作简便的血清中核酸的检测方法。

该方法包括如下步骤：

1.一种利用红外光谱检测血清中核酸的方法，包括：

a)对临床已确诊的肝癌，肺癌，胰腺癌和正常人取空腹静脉血；

b)用离心机离心后，不加抗凝剂，取上层血清保存待用；

c)血清采集后，立刻进行光谱采集，时间不超过1小时；

d)采集血清的红外光谱图光谱范围4000cm^-1-400cm^-1；

e)取核酸中磷酸二酯基团ν_asPO^-₂和蛋白质酰胺II谱带红外光谱谱面积相比；

f)在与步骤b)中相同的条件下取待测样本；

g)在与步骤c)中相同的条件下采集待测样本的红外光谱图；

h)取步骤f)中的红外光谱ν_asPO^-₂与酰胺II带谱面积相比。

本发明采用傅立叶红外光谱法对不同血清中的核酸含量进行了检测，此方法便捷、快速、经济。

附图说明

附图1是正常人、十二指肠癌、肝癌、肺癌患者的血清红外光谱；

附图2是红外光谱图正常血清与癌血清磷酸二酯基ν_asPO^-₂和酰胺II谱带。

具体实施方式

1.样品采集：血清取自临床已确认的肝癌、肺癌、胰腺癌和正常人，采取受试者的空腹静脉血5ml，用离心机离心5分钟，转速为2000转/分钟，不加抗凝剂，取上层血清保存。

2.红外光谱的采集：红外光谱仪为美国热电公司的Nicolet 360型傅里叶变换红外光谱仪。分辨率为4cm^-1，扫描累加32次，并将以上多次采集的光谱的平均结果作为样品的标准红外光谱图，扫描范围4000cm^-1-400cm^-1，室温(23℃)测量。

3.谱段的选择

通过观察对照血清红外光谱的差异选择谱段区域，即选择鉴别血清中的核酸官能团谱段，优先鉴别采用的谱段为1245cm^-1和1545cm^-1。FTIR光谱特征峰的确认详见后面表1。

4.血清的检测

我们按照与对照血清相同的方式样品制备、采集光谱，再在谱峰1245cm^-1和1545cm^-1处将待测样品光谱数据与对照血清光谱数据进行对比，分析。

具体来说，即若待测血清中核酸相对含量数值小于正常血清1.5时，表明该血清中核酸相对含量接近正常血清；核酸含量高于1.5时，血清可能发生病变，通过待测血清与对照血清相应指标(酰胺II，核酸ν_sPO₂的^-吸收频率，吸光度)对比分析可以反映出核酸相对含量在高于1.5时更接近哪种血清的匹配值(详见表2、3)。

表1 FTIR光谱特征峰的初步指认

表2 血清红外光谱特征吸收峰值(单位A)