[发明专利]兜兰DEFICIENS(DEF)-like MADS-box基因序列

权利要求书

1.一种分离出的兜兰DEFICIENS (DEF)-like MADS-box基因,其特征在于，具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的兜兰DEFICIENS (DEF)-like MADS-box基因，其特征在于，编码框的位置位于73bp-747bp，在73bp处有起始密码子ATG，在745bp处有终止密码子TGA，在1010 bp处有polyA附加信号，该序列无内含子，具有675 bp完整的开放读码框，编码224个氨基酸的多肽。

3.一种如权利要求1或2所述兜兰DEFICIENS (DEF)-like MADS-box基因编码的多肽，其特征在于，具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

4.一种兜兰DEFICIENS (DEF)-like MADS-box基因在其花器官中表达模式的分析方法，其特征在于包括如下步骤：

分别提取兜兰花的子房、萼片、花瓣、唇瓣、蕊柱，以及苞叶的总RNA，再将不同样品的总RNA分别反转录为cDNA第一链；

根据核苷酸序列SEQ ID NO.1，设计如下引物作为Real-time PCR的引物来扩增目的片段长为222bp的特异区段：

DEF F2 (5’→3’): AGCCCGATTTAGGGATACAA<SEQ ID NO.10>，

DEF R2 (5’→3’): ATACTCTTGGCGTCGGTGGA<SEQ ID NO.11>，

以兰花Tubulin为内参基因，设计特异引物：

Tubulin-F(5’→3’): GGATTAGGCTCTCTGCTGTTGG<SEQ ID NO.12>,

Tubulin-R(5’→3’): GTGTGGATAAGACGCTGTTGTATG<SEQ ID NO.13>，

扩增长为130 bp目的片段；

根据Real-time PCR试验结果，根据兜兰DEFICIENS (DEF)-like MADS-box基因在各花器官中的表达量进行表达模式的分析。