[发明专利]通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法及其应用

权利要求书

1.一种通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法，其特征在于，通过测定凤眼莲旺盛生长期内功能叶片的PEPC酶活性来判断其单株干重；所述的凤眼莲旺盛生长期是指每年的7～9月期间；所述的凤眼莲功能叶片材料是指：除去凤眼莲的心叶和最后一片衰老叶片后的其他叶片。

2.根据权利要求1所述的通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法，其特征在于：对旺盛生长期内凤眼莲的功能叶片的PEPC酶活性测定包括：

a)称取0.2g待测凤眼莲的功能叶片材料放入预冷的研钵，加入pH7.8的粗酶提取缓冲液：50mM/L Tris-HCl，5mM/L二硫苏糖醇，1mM/L氯化镁，2％聚乙烯吡咯烷酮，研磨，经4层纱布过滤，过滤的研磨液收集离心管，在4℃，12000rpm下，离心20min，取上清液，即为粗酶液；

b)叶绿素含量测定：粗酶液取40ul加到960ul无水乙醇中，分别在649nm、663nm和665nm下测定光吸收值，

总叶绿素含量Chl＝叶绿素a含量+叶绿素b含量；

叶绿素a＝12.7×A665-2.59×A649；

叶绿素b＝22.9×A649-4.67×A663；

式中：A665是指OD值在665nm测定的吸光值，A649是指OD值在649nm下测定的吸光值，A663是指OD值在663nm下测定的吸光值；

c)NADH吸光度变化：反应体系中加入pH8.0的50mmol Hepes-KHO，以及10mmol碳酸氢钠，5mmol氯化镁，0.2mmol NADH-Na₂，50ul粗酶液，1.5u苹果酸脱氢酶，用蒸馏水定容到1ml，混匀后加入5mmolPEP，在紫外分光光度计上记录90s内每15s记录1次340nm的光密度的下降数值，

d)PEPC酶的活性＝ΔOD340×10³/[6.3×Chl×(反应体系量/粗酶液体量)×反应时间)]。

3.根据权利要求2所述的通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法，其特征在于：待测凤眼莲的功能叶片材料源于取样点，取样点分布在被测种养区域中的取样区域内，取样区域不小于6m²。

4.根据权利要求1或2或3所述的通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法，其特征在于：单株干重与功能叶片的PEPC酶活性呈正相关，它们之间的决定系数为r²＝0.8894**，r²＝0.036，相关系数为r＝0.943***，r＝0.190。

5.一种如权利要求4所述方法的应用，其特征在于：在凤眼莲旺盛生长内，通过对凤眼莲的功能叶片的PEPC酶活性的测定获得的单株干重，确定凤眼莲规模化人工种养期收获的鉴定指标。