[发明专利]木霉菌-油菜联合吸附农田土壤重金属镉和锌的构建方法

权利要求书

1.一种吸附重属拮抗木霉菌株，包括：哈茨木霉(Trichoderma harzianum H6)和康氏木霉(Trichoderma koningii P6)，其特征在于，保藏号分别为：CGMCC No.4869，CGMCC No.4870；保藏日期为：2011年5月18日；保藏单位为：中国普通微生物菌种保藏管理中心。

2.一种木霉菌-油菜高效吸附重金属共生体的制备方法，其特征在于，通过将权利要求1所述的吸附重属拮抗木霉菌株制备的菌剂接种至含有Cd或Zn和油菜菌核病菌麦粒培养物的土壤上，进一步用于栽培甘蓝型油菜并得到木霉菌-油菜高效吸附重金属共生体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述的吸附重属拮抗木霉菌株通过将木霉菌孢子在含Zn²⁺或Cd²⁺的PD培养基中培养并筛选出去除靶标重金属效率达到40％以上的木霉菌株，然后再与菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和枯萎病镰孢菌(Fusarium oxysporium)对峙培养，最后筛选抑菌率达60％以上的菌株得到。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的木霉菌孢子是指：将木霉菌在PDA培养基上26-27℃培养一周，用无菌水洗下PDA平板上的分生孢子，制备10⁷孢子/mL。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的含Zn²⁺或Cd²⁺的PD培养基是指：马铃薯200g、葡萄糖20g、水1000mL且Zn²⁺或Cd²⁺的浓度为100mg/L。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的培养并筛选是指：将0.5mL木霉菌孢子的悬液接种于50mL含Zn²⁺或Cd²⁺的PD培养基中，在28℃130rpm振荡培养3d，然后取5mL培养液10000rpm离心10min，取0.5mL上清液，加入显色剂，无离子水定溶至10mL；最后采用分光光度计法，在549nm处测定溶液中Zn²⁺或Cd²⁺变化的OD值，筛选得到去除靶标重金属效率达到40％以上的吸附菌株。

7.根据权利要求3或6所述的制备方法，其特征是，所述的去除靶标重金属效率是指：

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述的含有Cd或Zn和油菜菌核病菌麦粒培养物的土壤通过以下方式得到：通过将含浓度为1M的ZnS O₄·7H₂O或CdSO₄·8H₂O溶液与经8mm筛的细土反复混匀，制备含重金属盐100mg·kg^-1，用无离子水最终将土壤湿度调至20％wt，在室温下保持1周；然后与油菜菌核病菌麦粒培养物以病菌培养物接种量为1％W/W的比例混合，用无菌水将土壤湿度调至相对湿度60％。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述的接种是指将吸附重金属的拮抗木霉菌剂按2-3％(W/W)与含有Cd或Zn和油菜菌核病菌麦粒培养物的土壤混合。

10.一种吸附重金属的拮抗木霉菌剂的制备方法，其特征在于，将木霉菌发酵液1000mL与硅藻土600g、精麸300g、稻草粉100g混合，在25-27℃下发酵5-7d。

11.一种吸附农田土壤重金属镉和锌的方法，其特征在于，通过上述任一权利要求所述的吸附重属拮抗木霉菌株实现。