[发明专利]一种四联菌片的菌种的活菌数检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，尤其是一种四联菌片的菌种的活菌数检测方法。属于保健食品领域，具体涉及四联菌片中长双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌等益生菌的选择性计数检测方法。

背景技术

健康有益的益生菌如嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热链球菌等被越来越多地添加到保健食品中，通过其中活菌的作用可以改善胃功能、调整肠道菌群、抑制病原菌的生长、提高蛋白质和维生素的代谢、防止便秘、缓解乳糖不耐症、抗肿瘤、增强免疫系统、降低胆固醇等，从而促进身体健康。为了确保此类益生菌能在体内发挥正常的生理保健功能，一些世界性的食品组织已经提出标准，要求在食品中双歧杆菌等益生菌的最低值为10⁶～10⁷CFU/g。因此，研究简便易行的选择性计数方法，加强此类产品的监控，对于提高产品质量，保护消费者的利益及健康，都具有极其重要的意义。如果产品中只有单一的菌株，易于计数，至于两株及两株以上的益生菌混合在保健产品中时分别计出活菌数比较困难，需要通过了解不同菌株的生理特性来选择鉴别培养基再进行计数。

国内外关于微生物选择性计数的研究主要集中在培养基的设计上，即利用选择性培养基，使益生菌表现出易于鉴别特征，便于区分计数。这些选择性鉴别培养基抑制其它菌的生长或者通过在此培养基上形成菌落的形态、大小及颜色易与其他菌区别，从而可单独的计数出目标菌株的活菌数。细菌计数常规用的方法主要有涂布法和倾注法，应用于乳酸菌计数，二者结果无差异，但涂布法由于菌落生长在平板表面，易于从形态上辨认和挑取菌落进行进一步分离和鉴定，提高计数结果的准确度，更真实反映样品中的乳酸菌数量。

目前已有一些关于混合菌乳制品的选择性计数方法。1978年Teraguch i等将新霉素-巴龙霉素-萘啶酮酸-氯化锂培养基(NNLP培养基)用于双歧杆菌的选择计数，该培养基在后来双歧杆菌计数培养基的发展中一直作为一种参考培养基。Lap ierre等的LP培养基，Chevalier等的改良MRS培养基均用于双歧杆菌的选择性计数；吕嘉枥等人研究的MRS-柳醇琼脂或MRS-山梨醇琼脂、添加麦芽糖的MRS-IM培养基，MRS-氯洁霉素用于嗜酸乳杆菌的选择性计数；MRS-万古霉素、LC培养基选择性计数干酪乳杆菌；ST培养基、M17培养基选择性计数嗜热链球菌。这些培养基虽然可以选择性计数混合益生菌，但由于菌种的差异性，这些培养基不一定适合于所有的菌株的选择性计数，而且有些培养基不具有很好的鉴别性，有些培养基配制繁琐成本高，所以有待于更简便的选择性计数培养基可以准确的计数这些益生菌。

本发明为了对四联菌片等保健食品中的不同益生菌包括长双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌等分别进行可靠计数，研制和开发出简便、成本低、计数效果显著的鉴别性培养基。

技术方案

本发明的目的在于提供四联菌片中长双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌等益生菌的选择性计数的准确简便的检测方法

本发明是采用三种不同培养基对四联菌片中的不同的四株益生菌(长双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌)进行计数。长双歧杆菌活菌数的检测是通过在培养基中添加抗生素或其他试剂，使得培养基对其他益生菌有一定程度的抑制作用，而对长双歧杆菌抑制作用很小或没有抑制作用。干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数检测采用了MRS培养基，需氧培养。在此培养基上需氧条件下培养42-50h只有干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌生长，且可以通过菌落形态的不同，能分辨出这两株菌。

本发明是提供了四联菌片的选择性计数检测方法，其特点在于培养基中添加抗生素抑制其它菌或通过菌落形态分辨出目标菌株。其中检测培养基有双歧杆菌检测培养基、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌检测培养基、嗜热链球菌检测培养基。

本发明的一种四联菌片的菌种的活菌数检测方法，其中，分别用双歧杆菌筛选培养基、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌筛选培养基、嗜热链球菌筛选培养基对处理过的四联菌片进行培养，并进行计数；

其中，双歧杆菌筛选培养基中添加抗菌素；

双歧杆菌筛选培养基在厌氧条件下使用；

干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌筛选培养基需在需氧条件下使用。

其中，利用培养基进行培养的四联菌片包括：均具有菌种活性的四联菌片和非定向检测的菌失活的四联菌片。

上述的抗菌素为：浓度为0.1-0.3mg/mL的牛胆盐溶液和浓度为12-18μg/mL的硫酸庆大霉素。

其中双歧杆菌检测培养基的配方为：

其中培养基的配方组份的重量份为：