[发明专利]一种用高效液相色谱仪检测N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的检测方法，特别是涉及一种用连接二极管阵列检测器的高效液相色谱技术检测N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的方法。 

【背景技术】

N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷是脱氧核苷的衍生物，在反义药物的合成步骤中是一个关键单体。目前反义药物已成为化学药的重要组成部分，每年世界各国需要大量的原料药和药物中间体用于化学药的合成。 

研究发现，N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷会刺激眼睛、皮肤、呼吸道和消化道，与其接触会造成眼睛和皮肤疼痛，加热时其分解会产生一氧化碳、二氧化碳、刺激性和毒性气体。由于其对生态环境会产生持久性和生物累积性的毒害，因此在2009年8月19日出版的《加拿大政府公报》中被作为增补条例列入《加拿大环境保护法1999》，即CEPA 1999。此外，在欧盟和美国，N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷也被列入了管控目录，因此需要对产品中的N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷进行定性和定量检测，使之符合法规要求。然而，我国目前尚没有N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的标准检测方法，文献中也未见对其检测方法的报导，在我国建立快速、准确、灵敏度高的N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的检测方法势在必行。 

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提出一种用常规的连接二极管阵列检测器的用高效 液相色谱技术可准确定性定量产品中的N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的检测方法。 

本发明解决所述技术问题可以通过采用以下技术方案来实现： 

包括以下步骤： 

①「称取适量样品，选择合适的溶剂，使用索氏提取法对样品进行萃取处理； 

②「使用过滤法对萃取处理后的样品和萃取液进行分离，得到萃取清液； 

③「利用旋转蒸发仪浓缩萃取清液，形成浓缩溶液； 

④「将浓缩溶液用与萃取步骤相同的溶剂进行定容，用0.45um滤膜过滤后，形成待测溶液； 

⑤「对高效液相色谱仪所用有机流动相的比例设定为60％，无机流动相的比例设定40％，流速设定为1ml/min，进样量设定为10uL，色谱柱选择C18反相色谱柱； 

⑥「将经过前处理的样品由所述高效液相色谱仪的流动相带入所述色谱柱中，将柱温箱的温度设定为20℃，所述样品的各组分被色谱柱分离； 

⑦「所述被色谱柱分离的样品各组分进入二极管阵列检测器进行检测，所述检测器的灯源采用氘灯，检测波长为280nm；所述C18色谱柱填充物粒径5um，规格250mm*4.6mm(I.D)。 

优选的方案为： 

溶剂为甲醇或乙腈。 

使用索氏提取法对样品进行萃取处理的时间为4-8h。 

有机流动相为乙腈。 

无机流动相为水。 

C18色谱柱填充物粒径5um，规格250mm*4.6mm(I.D)。 

本发明的技术效果在于： 

1、采用高效液相色谱仪—二极管阵列检测器技术HPLC-DAD进行检测，与 GC-MS相比，易于检测目标物质，分析方法准确、安全； 

2、前处理方法准确、快速、回收率高； 

3、通过选择合适的色谱柱，设定合适的流速，流动相比例和最大吸收波长，能对样品中各组分进行最优化的分离。 

附图说明

图1是本发明实施例1所检测的N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的色谱图； 

图2是本发明实施例1所检测的N6-苯甲酰基-5′-O-(4，4′-二甲氧基三苯基)-2′-脱氧腺苷的标准曲线图。 

具体实施方式

以下结合附图所示之最佳实施例作进一步详述。