[发明专利]一株适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一株适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株，其微生物保藏号是：CCTCCV201113；分类命名：新城疫病毒TS09-C株；保藏时间是：2011年5月9日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地址：中国.武汉.武汉大学。

2.按权利要求1所述的适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株的制备方法，其特征在于：所述的新城疫病毒耐热弱毒株在幼仓鼠肾传代细胞中的增殖效价达10^8.0TCID₅₀/ml。

3.按权利要求1所述的适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株的制备方法，其特征在于：所述的新城疫病毒耐热弱毒株的血凝素-神经氨酸酶基因序列为SEQ ID NO：1，序列总长度为1851bp。

4.按权利要求1所述的适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株的制备方法，其特征在于：所述的新城疫病毒耐热弱毒株与原型株TS09株的HN基因序列的核苷酸同源性为88.2％。

5.权利要求1所述的适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株的制备方法，其特征在于：在含有0.2μg/ml TPCK-胰酶的培养条件下，将新城疫病毒TS09鸡胚适应株在幼仓鼠肾传代细胞中进行17次连续传代培养，其中包括有3次为极限稀释法纯化，传至第17代即获得适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株，即新城疫病毒TS09-C株。

6.一种预防新城疫的耐热活疫苗，其特征在于由权利要求1所述的有效量的适应幼仓鼠肾传代细胞的新城疫病毒耐热弱毒株和药学上可接受的载体和辅料组成。

7.按权利要求6所述的预防新城疫的耐热活疫苗，其特征在于所述的新城疫为鸡新城疫、鸽新城疫或鹌鹑新城疫。

8.权利要求6所述的预防新城疫的耐热活疫苗的制备方法，其特征在于包括有以下步骤：选用幼仓鼠肾传代细胞，倾弃培养液后，换以含体积比0.1％的新城疫病毒TS09-C株病毒种子液的无血清DMEM营养液，置于37度培养2～3日后，经三次反复冻融，离心取上清，即获得病毒液，置-20度保存，取病毒液进行无菌检验和病毒效价检验，经检验合格的病毒液与保护剂含蔗糖的脱脂牛奶混合，充分摇匀后分装，迅速进行冷冻真空干燥，即得预防新城疫的耐热活疫苗。