[发明专利]五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法

权利要求书

1.  五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，其特征在于，具体步骤为：        

    步骤1）准备材料

    金银花、紫花地丁、蒲公英、蒲公英、野菊花、葛根、丹参；清洁级KM种小鼠；角叉菜胶、阿司匹林泡腾片、肿瘤坏死因子-α、白介素-6和 ELISA试剂盒；

    步骤2）五味消毒饮加味提取物的安全限度试验

以由金银花、紫花地丁、蒲公英、蒲公英、野菊花组成的五味消毒饮为基础，加葛根与丹参两种中药,采用水提醇沉的方法，提取分离出五味消毒饮加味提取物，对五味消毒饮加味提取物的浸膏进行安全限度试验：取若干偶数只清洁级KM种小鼠，雌雄各半，分为相同只数2组，阴性对照组1组，待试药物1组，禁食8小时后，以动物能耐受的最大浓度，最大体积的药量，24h内，分2次灌胃给药，每次0.4 ml/10g体重(折合生药量为450（生药）/kg)，阴性对照用等剂量生理盐水灌胃，连续观察7天，每天固定时刻观察动物的死亡情况；

    步骤3）小鼠分组及给药

取若干偶数只清洁级KM种小鼠，雌雄各半，分为相同只数的6组，即生理盐水组、模型对照组、阿司匹林阳性对照组（5g/kg），五味消毒饮加味提取物小剂量组（10g（生药）/kg）、中剂量组（20g（生药）/kg）、大剂量（40g（生药）/kg）3个给药组；每日固定时间按0.2ml/10g体积灌胃给药，每天1次，连续7天；末次给药前标记并测定右后足周长，取两次测量的平均值为准；末次给药30分钟后，于小鼠右后足踝部注射20μL/只0.5%的角叉菜胶致炎，于致炎后30min,90min,120min,180min分别测定足周长，生理盐水组同法注射生理盐水（20μL/只），测定结束后，眼眶取血，滴少量制作血涂片，其余全血于4^oC 5000转/分离心5分钟，分离血清，-20^oC保存以备测定；

步骤4）肿瘤坏死因子-α和白介素-6水平测定 

取血清样品，按照肿瘤坏死因子-α和白介素-6试剂盒说明书，用ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α和白介素-6的水平；

步骤5） 统计学处理 

数据均以均数±标准差（                                                +s）表示,用SPSS 10.0软件进行统计分析,统计方法采用单因素方差分析,组间均数比较采用F检验, P < 0.05表明组间差异有统计学意义。

2.根据权利要求1所述的五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，其特征在于，所述步骤1）中清洁级KM种小鼠的体重在20-25g之间。

3.根据权利要求1所述的五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，其特征在于，所述步骤2）中，所取的清洁级KM种小鼠为40只。

4.    根据权利要求1所述的五味消毒饮加味提取物对小鼠角叉菜胶炎症的研究方法，其特征在于，所述步骤3）中，所取的清洁级KM种小鼠为60只。