[发明专利]一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法

权利要求书

1.一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于快速检测单增李斯特菌活菌的方法，按以下步骤进行：一、受检乳样的前处理：向1mL受检乳中加入PMA，使PMA的浓度为50μmol/L，然后置于暗处放置5～30min，接着置于距650W卤素灯15～20cm处，曝光5～30min；二、样品DNA的提取：向步骤一处理后的受检乳中加入150μL浓度为250g/L的柠檬酸钠和100μL浓度为1mol/L的氢氧化钠，然后于10000r/min离心2min，弃上清，得沉淀；三、用质量浓度为0.85％的生理盐水洗涤沉淀，然后于10000r/min离心1min，弃上清，用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，得提取物；四、以提取物作为模板进行LAMP扩增，得到LAMP扩增产物；五、鉴定：取5μL LAMP扩增产物，点样于质量浓度为2％的琼脂糖凝胶中，以100V电压在1×TAE电泳缓冲液中电泳30min，然后在凝胶成像系统中成像，即完成检测。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤一中置于暗处放置10～20min。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤一中置于暗处放置15min。

4.根据权利要求1或2所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤一中置于距650W卤素灯15cm处。

5.根据权利要求1或2所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤一中置于距650W卤素灯20cm处。

6.根据权利要求4所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤一中曝光10～20min。

7.根据权利要求4所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤一中曝光5min。

8.根据权利要求6所述的一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于步骤四中LAMP扩增的反应体系为25μL反应体系，由下列成分组成：

LAMP扩增条件为：95℃5min，迅速置于4℃加入Bst酶，63℃60min，80℃2min。