[发明专利]心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法及其诊断试剂盒

权利要求书

1.一种心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法，其特征在于，包括以下主要步骤：

(1)将捕获抗体与不同编号的微球Beads偶联，形成“捕获抗体-微球”二联复合体，所述的每一种捕获抗体分别抗一种心脑血管疾病相关的蛋白标志物，从而使待测样品中的心脑血管疾病相关的蛋白标志物与捕获抗体形成“心脑血管疾病相关的蛋白标志物-捕获抗体-微球”三联复合体；所述的心脑血管疾病相关的蛋白标志物包含以下标志物的任意一种或任意多种或加上其它标志物的组合：D-二聚体D-D、纤溶酶原激活物抑制物PAI-1、组织型纤溶酶原激活物tPA、瘦素LEP、载脂蛋白B ApoB；

(2)将不同的检测抗体进行信号标记，其中所述的每一种检测抗体分别抗一种心脑血管疾病相关的蛋白标志物且对应于捕获抗体，并与捕获抗体分别结合于该蛋白标志物的不同抗原表位；

(3)将步骤(1)形成的三联复合体与步骤(2)中的带有信号标记的检测抗体混合，从而形成“信号标记的检测抗体-心脑血管疾病相关的蛋白标志物-捕获抗体-微球”四联复合体；

(4)用液相芯片法xMAP检测出四联复合体中不同微球的标记信号，从而确定待检测样品中各种心脑血管疾病相关的蛋白标志物的存在及含量。

2.如权利要求1所述的心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述确定待检测样品中各种心脑血管疾病相关的蛋白标志物的含量，其具体方法为：将步骤(4)中测定的标记信号与标准曲线进行比较，从而确定待检测样品中各种心脑血管疾病相关的蛋白标志物的含量。

3.如权利要求1所述的心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的微球是一种颜色编码微球Colot-coded Beads，且结合了不同荧光染料的聚苯烯微球。

4.如权利要求1所述的心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法，其特征在于，所述的捕获抗体和检测抗体是针对以下5种标志物自由组合的心脑血管疾病相关的蛋白标志物的捕获抗体和检测抗体：

D-二聚体D-D、纤溶酶原激活物抑制物PAI-1、组织型纤溶酶原激活物tPA、瘦素LEP、载脂蛋白B ApoB。

5.如权利要求1所述的心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中用液相芯片法xMAP进行检测，可检测的标记信号是荧光信号。

6.一种检测心脑血管疾病相关的蛋白标志物的诊断试剂盒，其特征在于，包括以下主要组成成分：

(1)偶联抗体的微球：含有分别偶联了不同捕获抗体的微球，包含以下任意一种或任意多种微球：偶联了D-二聚体D-D捕获抗体的微球、偶联了纤溶酶原激活物抑制物PAI-1捕获抗体的微球、偶联了组织型纤溶酶原激活物tPA捕获抗体的微球、偶联了瘦素LEP捕获抗体的微球、偶联了载脂蛋白B ApoB捕获抗体的微球；每种捕获抗体分别抗一种心脑血管疾病相关的蛋白标志物并且偶联于不同编号的微球，形成“抗体-微球”的二联复合体；

(2)信号标记的检测抗体：包含以下任意一种或任意多种带有信号标记的检测抗体：标记的D-二聚体D-D检测抗体、标记的纤溶酶原激活物抑制物PAI-1检测抗体、标记的组织型纤溶酶原激活物tPA检测抗体、标记的瘦素LEP检测抗体、标记的载脂蛋白B ApoB检测抗体；其中所述的每一种检测抗体分别抗一种相应的心脑血管疾病相关的蛋白标志物且对应于捕获抗体，并与捕获抗体分别结合于该蛋白标志物的不同抗原表位；

(3)标准品：包含各种心脑血管疾病相关的蛋白标志物的标准品；

(4)质控品：包含阳性对照和阴性对照。

7.如权利要求6所述的检测心脑血管疾病相关的蛋白标志物的诊断试剂盒，其特征在于，所述的捕获抗体和检测抗体是包含针对以下5种自由组合的心脑血管疾病相关的蛋白标志物的捕获抗体和检测抗体：

D-二聚体D-D、纤溶酶原激活物抑制物PAI-1、组织型纤溶酶原激活物tPA、瘦素LEP、载脂蛋白B ApoB。

8.一种如权利要求6或7所述的诊断试剂盒在检测体外样品中心脑血管疾病相关的蛋白标志物的存在和含量中的应用，以及在心脑血管疾病的危险因素筛查或预测、诊断检测、疗效监测和预后判断中的应用。

9.一种如权利要求6或7所述的诊断试剂盒在除心脑血管疾病以外的其他疾病的诊断检测或预测、疗效监测和预后判断中的应用。