[发明专利]用于降解硝基苯的重组质粒、基因工程菌及其制备方法

权利要求书

1.一种用于降解硝基苯的重组质粒，其特征在于，在酶切位点BglII和XhoI之间依次含有SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的基因序列。

2.一种含有权利要求1所述重组质粒的基因工程菌，其特征在于，该基因工程菌保存在中国专利局指定的保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为：CGMCC No.4798。

3.一种权利要求1所述用于降解硝基苯的重组质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）通过PCR获得编码硝基苯降解过程中所需的硝基苯硝基还原酶、羟基苯胺变位酶和2-氨基酚-1,6-双加氧酶的编码基因；

（2）将上述基因连接到载体pET-21a(+)中，再通过PCR获得三个带T7启动子的编码基因，如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

（3）通过重叠PCR将SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2连接，再连接到另一新载体pET-21a(+)，得到重组载体；

（4）通过酶切法将SEQ ID NO.3连接到步骤（3）获得的重组载体中，构建出重组质粒。

4.一种权利要求2所述基因工程菌的制备方法，其特征在于，该方法具体为：将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，即得到基因工程菌。