[发明专利]特利加压素的制备方法

权利要求书

1.特利加压素的制备方法，包括固相多肽合成法制备特利加压素线性肽树脂、特利加压素线性肽树脂酸解得到特利加压素线性肽粗品、特利加压素线性肽粗品氧化后得到特利加压素粗品、特利加压素粗品纯化得到特利加压素纯品，其中固相多肽合成法制备特利加压素线性肽树脂的方法为：氨基树脂通过固相偶联合成法依次接入下列序列中对应片段的Fmoc-保护氨基酸，制备特利加压素线性肽树脂；

R₁-X-Cys(R₂)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(R₃)-Asn(R₃)-Cys(R₂)-Pro-Lys(Boc)-Gly-树脂

其中，X片段为Gly-Gly-Gly，R₁为R₄或H，R₂为Trt或Acm，R₃为Trt或H，R₄为Fmoc或Boc；

接入X片段时仅用1次固相偶联合成反应，接入X时对应的Fmoc-保护氨基酸为Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH。

2.根据权利要求1所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂取代值为0.2～1.2mmol/g树脂。

3.根据权利要求1或2所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂选自Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种。

4.根据权利要求1或2所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述Fmoc-保护氨基酸种类分别为：R₄-X-OH、Fmoc-Cys(R₂)-OH、Fmoc-Asn(R₃)-OH、Fmoc-Gln(R₃)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH；

其中，X为Gly-Gly-Gly，R₂为Trt或Acm，R₃为Trt或H，R₄为Fmoc或Boc。

5.根据权利要求4所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：Fmoc-保护氨基酸用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍。

6.根据权利要求1或2所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：固相偶联合成法具体为：前一步反应得到的Fmoc-保护氨基酸-树脂脱去保护Fmoc后再与下一个保护氨基酸偶联反应；脱去Fmoc保护的试剂为哌啶/N，N-二甲基甲酰胺溶液，哌啶体积比为10～30％。

7.根据权利要求6所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：固相偶联合成法需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯；

活化试剂选自1-羟基苯并三唑、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。

8.根据权利要求6所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：缩合试剂的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍；活化试剂用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍。

9.根据权利要求1～8任一项所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：特利加压素线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到特利加压素线性肽粗品：

H-X-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH₂

其中，X为Gly-Gly-Gly。

酸解剂为三氟醋酸、1，2-乙二硫醇和水混合溶剂，混合溶剂的配比为：三氟醋酸的体积比为80～95％，1，2-乙二硫醇的体积比为1～10％，余量为水；酸解剂用量为每克肽树脂4～15ml酸解剂。

10.根据权利要求1～8任一项所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：特利加压素线性肽粗品氧化后得到特利加压素粗品时，特利加压素线性肽先用醋酸溶解，过滤后用氧化剂氧化环化，氧化剂为碘、H₂O₂或DMSO中的至少一种。