[发明专利]一种具有双结构域的低温中性植酸酶PhyH及其基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种具有双结构域的低温中性植酸酶PhyH及其基因和应用。

背景技术

myo-肌醇六磷酸(IP₆，myo-inositol hexakisphosphate)又叫做植酸(phytic acid)，是自然界中肌醇磷酸的最常见的形式。植酸的分子式是C₆H₁₈O₂₄P₆，分子量是660.09。

植酸主要以植酸钙镁钾盐的形式广泛存在于植物种子内，也存在于动物有核红细胞内，在土壤、植物以及微生物分泌到胞外的酶中都发现有植酸酶的存在。可想而知，植酸酶对于自然环境中磷的代谢循环有着重要的作用。另外，植酸对绝大多数金属离子都有极强络合能力，络合力与EDTA相似，但比EDTA的应用范围更广。在通常条件下，植酸中的磷酸酯键是非常稳定的，对于植酸的降解一般有两种方法，一是化学方法，但利用化学方法来降解植酸是极其困难的；另一种方法是酶解法，目前我们已知的能够有效降解植酸的只有植酸酶。

目前植酸酶已经广泛的应用于饲料行业，特别是来源于真菌和细菌的组氨酸酸性磷酸酶类(HAP)植酸酶，因其最适pH偏酸和比活高等特点，可以显著的提高它们在鸡和猪的生产性能。如大肠杆菌和曲霉来源地植酸酶已经广泛地应用在动物养殖业。但因为在水产养殖业中的鱼类生长环境和体内温度较低，pH偏中性，导致HAP类植酸酶的应用受到了限制，所以具有中性pH特征的BPP类植酸酶越来越受到关注。但是目前已知BPP类植酸的最大缺点是催化效率低，很难满足实际生产需求。所以获得新型优质BPP植酸酶，提高BPP类植酸酶的催化效率，都将可以大大扩展其实际应用空间，也正是目前急需解决的问题和热点。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有双结构域的低温中性植酸酶。

本发明的另一目的是提供编码上述双结构域低温中性植酸酶的基因。

本发明的另一目的是提供上述植酸酶N端及C端结构域及其编码基因，其中，N端结构域可以协同提高其他植酸酶的催化效率。

本发明的另一目的是提供包含上述具有双结构域的低温中性植酸酶基因的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述具有双结构域的低温中性植酸酶基因的重组菌株。

本发明的另一目的是提供上述具有双结构域的低温中性植酸酶的应用。

本发明从芽孢杆菌(Bacillus sp.HJB17)(微生物保藏号是：CGMCC No.4868；保藏时间是：2011年05月18号；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。100101)中分离得到一种新的具有双结构域的低温中性植酸酶PhyH。

本发明提供了一种具有双结构域的低温中性植酸酶PhyH，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

MLVAKKLATKNMFLLGAVSLTLLAMLSGCQAGKFATPISAAVQPLSVNASHFHKVQLAGQDYQLFTTTTALQIRQGNRELAQQAGQFSRLVLQPLDTDALLLAAMDINSNTLFLWRFSTKQTPSLQLLQRRLISSRVVDDLCFYHSTENQQLSLFLLGGRGGADQLLLQQQQQWLAQPVVIRELNIPYDSTACVVDQTAGALYIAEADRAIWRYQAEPEADEGRSLVQVNKPFGQLQGEVKALQTLSDGSLLALEEAPARLLHINSDGQLRSAIAVPALAEASGLAVSMQGNTATAYISTEDAGAVQQLAVVPQAKPERQPKAPVVQLLPTLQTEPASQRGDVMDDPAVWHHPARPELSLILGTDKRAGLDVYNMQGTRVQQLSVGRLNNVDVRYGLNWQGSAHDIAVASLRDDNSLQLFAIDSSGTLHNAGKVATSMSEIYGLCMYHSAQ SNKHYVFVNDKAGLIQQYRIDTDGDHWQGSLVRALQVPSQPEGCVADDIRGLLFVGEEDAAIWRFAAEAEATTTGEAIIRVDGERLVDDIEGITLAEHNGSSYLLVSSQGNDSYLVFDAAPPYTERPHFRIGTNPLLGIDGASETDGVDVTTRSLGPGFEQGAFIVQDGRNRMPEQGQNLKLVPWADILQQLN