[发明专利]一种组织工程化淋巴结模型及其构建方法

说明书

技术领域

本发明属于组织工程与再生医学技术领域，具体涉及一种组织工程化淋巴结模型及其构建方法。

背景技术

淋巴系统对人体的重要性日趋显现，淋巴组织生物学研究发展的需要推动了构建适合模型的研究。组织工程淋巴器官(淋巴结、脾脏、淋巴管和淋巴细胞)不仅可以作为体外研究模型，还具有移植治疗疾病或损伤引起的淋巴缺陷的潜在应用价值。Chistoph Giese等(Chistoph Giese等，Artifical Organs，2006，30，803)在体外通过生物反应器培养外周血单核细胞来源的树状突细胞取得成功，Sachiko Suematsu等(Sachiko Suematsu等，Nuture Biotechnology，2004，22，1539)将接种了胸腺基质细胞(TEL-2-LTα)的“海绵样”胶原支架移植到小鼠体内，能够产生“淋巴组织样类器官”，其结构类似于次级淋巴器官并能够在宿主中产生抗体。然而，目前为止，未见基于胶原-Mstrigel支架材料构建的组织工程化淋巴结模型的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组织工程化淋巴结模型，该模型包含添加了淋巴细胞刺激物的淋巴组织分离的淋巴细胞以及胶原-Matirgel支架材料。

本发明的目的还在于提供一种组织工程化淋巴结模型的构建方法。

一种组织工程化淋巴结模型，该模型包含淋巴组织中分离获得的淋巴细胞以及胶原-Matrigel支架。

所述淋巴细胞来源于胸腺组织、脾脏组织或外周血；所述胶原为I型鼠尾胶原；所述胶原-Matirgel支架中胶原与Matirgel的质量比为(0.1-9)∶1。

一种组织工程化淋巴结模型的构建方法，按照如下操作步骤进行：

(1)制备淋巴细胞悬液

用2×RMPI 1640培养液重悬淋巴细胞制备细胞密度为5×10⁴～5×10⁷/mL的淋巴细胞悬液；

(2)制备原代小鼠成纤维细胞悬液

用2×H-DMEM培养液重悬小鼠成纤维细胞制备细胞密度为5×10⁴～5×10⁷/mL的MEF细胞悬液；

(3)细胞与支架材料的复合及细胞-支架复合物的培养

将步骤(1)制得的细胞悬液和步骤(2)制得的细胞悬液按细胞数量比为(5-1)∶1混合，然后在细胞混合悬液中加入浓度为0.5-4.0mg/mL的胶原与Matrigel，其中胶原与Matrigel的质量比为(0.1-9)∶1，混匀后，用0.1M的NaOH溶液调节其pH值至7.2-7.4；

(4)静态拉伸模具制备

将细胞培养板的每孔注入1ml的质量浓度为2％的无菌琼脂，琼脂凝固后，均匀插入4根长1cm的无菌玻璃毛吸管，紫外灯照射30min；

(5)将步骤(3)获得的细胞-支架复合物加至步骤(4)制得的静态拉伸模具中，置于5％CO₂、37℃的培养箱中培养30min，待细胞-支架复合物凝胶化后再加入含有10％胎牛血清和淋巴细胞刺激物的RMPI 1640培养基，培养3-14天，即得到组织工程化淋巴结模型。

4、根据权利要求3所述一种组织工程化淋巴结模型的构建方法，其特征在于，步骤(4)所用淋巴细胞刺激物为刀豆蛋白A，其浓度为10-40μg/ml，或者植物凝激素A，其浓度为10-40μg/ml。

本发明的有益效果：本发明采用I型鼠尾胶原和Matrigel基质胶作为组织工程化淋巴结模型的支架，该支架体系在施加静态拉伸力后能够更好地模拟体内环境，支持淋巴细胞的生长、增殖、细胞因子的分泌以及表面标志的表达，对未来应用组织工程淋巴结模型进行生物材料免疫毒性评价及免疫药物筛选等具有重要意义。本发明的构建方法操作工艺简单、实施条件温和。

附图说明

图1为培养3d后的组织工程淋巴结模型宏观观察图。

图2为培养7d后的组织工程淋巴结模型宏观观察图。

具体实施方式

通过以下实施例对本发明做详细描述，但是以下实施例仅仅是作为例证，并不对本发明构成任何限制。以下实施例中未详细说明的部分请参阅Robert Lanza，Robert Langer and Joseph Vacanti编写的《Principles of Tissue Engineering》第三版和Anthony Atala，Robert P.Lanza编写的《Methods of tissue engineering》(2006)。