[发明专利]一种基于自组装材料对癌细胞表面增强拉曼检测的方法

权利要求书

1.一种基于自组装材料对活细胞癌细胞表面增强拉曼检测的方法，其特征在于：金纳米棒探针及金纳米粒子探针制备, 金纳米棒探针和金纳米粒子探针的自组装，癌细胞的培养，表面增强拉曼检测癌细胞；工艺步骤为：

（1）金纳米棒探针及金纳米粒子探针的制备

金纳米粒子和巯基修饰的DNA进行偶联形成金纳米粒子探针；

采用不同的方法对金纳米棒的全身、侧面及端面修饰DNA形成全身修饰；侧面修饰、端面封闭；端面修饰、侧面封闭三种不同类型的金纳米棒探针： 

（2）金纳米棒探针和金纳米粒子探针自组装

对步骤（1）制备好的金纳米棒探针和金纳米粒子探针进行自组装形成三种不同的自组装结构：金纳米粒子围绕金纳米棒组装形成卫星式组装结构；金纳米粒子围绕金纳米棒侧面组装；金纳米粒子和金纳米棒端面组装；

（3）Hela细胞的培养

利用培养基对Hela细胞进行培养；

（4）表面增强拉曼检测癌细胞

将步骤（2）制备好的三种自组装材料分别加入到步骤（3）培养的Hela细胞中进行表面增强拉曼检测。

2.根据权利要求1所述的基于自组装材料对活细胞癌细胞表面增强拉曼检测的方法，其特征在于金纳米粒子探针及金纳米棒探针制备：

1）金纳米粒子探针制备

洁净的三角烧瓶中加入95mL的超纯水，而后向水中加入5mL的浓度为2g/L的氯金酸，加热，煮沸，紧接着加入2.5mL 质量浓度1%的柠檬酸三钠溶液，边加热边搅拌，溶液颜色从淡黄色变成红色，反应持续6-8min以使柠檬酸三钠完全沉降，最后，溶液冷却至室温，用超纯水稀释到100mL，4℃保藏，即制得粒径18nm级的金纳米粒子；

 将5mL的金纳米粒子10000rpm离心10min用0.5mL的超纯水分散，10000rpm离心10min弃上清，用1mL的超纯水分散，4℃保藏、待用；

 取步骤制备的金纳米粒子80μL加入8μL 100μM的ASY1，混匀，室温静置反应12h后，加入2.1μL的2M的NaCl溶液至反应体系中NaCl浓度达到50mM，混匀，室温静置反应12h；

所述ASY1为：5’-TAGGAATAGT TATAAAAAAA AAAAA-3’；

 将步骤中反应溶液在10000rpm离心10min，弃上清，后用80μL超纯水分散沉淀，后用超纯水清洗一次，4℃保藏、待用，得金纳米粒子探针；

2)金纳米棒探针制备

晶种合成：28℃下0.1mL的2g/L的三水合四氯金酸加入到1mL 的0.2M的十六烷基三甲基溴化铵溶液中，溶液颜色由无色变成黄褐色，然后加入0.12mL新配制的0.01M硼氢化钠溶液，快速搅拌2min，溶液颜色即由黄褐色变为浅棕色；

金纳米棒生长：金种子溶液合成好以后，进行金纳米棒的生长，5mL的2g/L的三水合四氯金酸加入到5mL、0.2M十六烷基三甲基溴化铵溶液中，加入4mL的超纯水，混匀，0.125 mL的 0.01M硝酸银溶液加入到上述混合体系中，混匀，随后将65μL、0.1M抗坏血酸溶液加入上述体系中，28℃下搅拌反应2min，溶液由褐色变成无色，最后，加入0.05mL的晶种溶液轻柔搅拌混匀20s，28℃反应4h，制得金纳米棒；

将5mL金纳米棒10000rpm离心10min用0.5mL的超纯水分散，10000rpm离心10min弃上清，用0.5mL的0.005M 十六烷基三甲基溴化铵溶液分散，4℃保藏、待用，用于修饰；

 全身修饰：

取上述待用的金纳米棒10μL加入4μL的100μM的ASY2，混匀，室温振摇反应12h，6000rpm离心10min，弃上清，用10μL的超纯水分散沉淀，超纯水洗一次，4℃保藏、得全身修饰的金纳米棒探针；

所述ASY2为：5’-TTATAACTAT TCCTAAAAAA AAAAA-3’；

 侧面修饰、端面封闭：

取上述待用的金纳米棒10μL加入1μL的10μM的辅助ASY3振摇反应12h，封闭端面，后加入4μL的100μM的ASY2修饰侧面，混匀，室温振摇反应12h，6000rpm离心6min，弃上清，用10μL的超纯水沉淀，超纯水洗一次，4℃保藏、得侧面修饰、端面封闭的金纳米棒探针；

所述ASY3为：5’-AAAAAAAAAA-3’；

端面修饰、侧面封闭：

取上述待用的金纳米棒10μL加入1μL的10μM的ASY2，混匀，室温振摇反应12h，后加入4μL的100μM的辅助ASY3封闭侧面，混匀，室温振摇反应12h，6000rpm离心6min，弃上清，用10μL的超纯水分散，超纯水洗一次，4℃保藏、得端面修饰、侧面封闭的金纳米棒探针；

 对照组

取上述待用的金纳米棒10μL加入4μL的100μM的辅助ASY3振摇反应12h，6000rpm离心6min，弃上清，用10μL的超纯水分散，超纯水洗一次，4℃保藏、得金纳米棒-ASY3复合物。