[发明专利]一种蝉花的仿生培养方法

说明书

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及以一种利用真菌蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae(Miquel)Samson)、昆虫体和介质进行蝉花仿生培育的方法。

背景技术

蝉花，是我国名贵中药材。关于蝉花的药用历史，早在南北朝雷斅的《雷公炮炙论》就有加工蝉花的记载。《经史证类备急本草》则记载“蝉花味甘寒，无毒，主小儿天吊、惊痫、瘛疯、夜啼、心悸”。因其有性阶段跟冬虫夏草同属，民间常用其为冬虫夏草的替代品。

蝉花含有丰富的营养素和生物活性物质，研究证实蝉花含有丰富的蛋白质、氨基酸、微量元素、脂肪酸、维生素以及糖类等营养物质；此外还含有多糖、虫草酸、腺苷、麦角甾醇、透明质酸、多球壳菌素等生理活性成分。蝉花中含有多种不同类型的化合物，正是这些物质使得蝉花具有广泛而神奇的药理学功效。蝉花主要有如下药理作用：(1)免疫调节作用，蝉花有显著促进正常小鼠体液免疫功能和提高巨噬细胞吞噬功能的作用。(2)抗肿瘤作用，研究表明，蝉花粗提物对癌细胞的生长有明显的抑制作用，且存在剂量关系，抑瘤作用与细胞周期有相关性。(3)造血功能，通过蝉花对造血功能的影响的实验研究，发现蝉花对小鼠失血性贫血和抗盐酸笨肼贫血有明显的改善和治疗作用，提示蝉花有促进造血系统功能。(4)降血糖作用，蝉花水煎液对四氧嘧啶造成的糖尿病小鼠有显著的降低血糖的作用，而且呈现明显的量效关系。(5)抗应激、抗疲劳的作用，蝉花水煎剂能明显延长实验小鼠的游泳时间，明显提高常压缺氧状态下的存活时间及在高温下的存活时间，表明蝉花水煎剂有抗应激、抗疲劳的作用。(6)调节脂类物质代谢，蝉拟青霉有利于大鼠体内脂类物质的运输、转化代谢。用500mg/kg的蝉拟青霉大鼠皮下注射12d后，与生理盐水对照组比较，发现大鼠血液中碱性磷酸酶、尿素氮、胆固醇下降，其中胆固醇下降明显。(7)抗衰老作用，蝉花水煎剂高剂量组对雄性果蝇能显著地延长寿命，表明其有一定的抗衰老作用。(8)清除自由基，蝉拟青霉总多糖是一种良好的自由基清除剂或自由基反应抑制剂。(9)抗慢性肾衰竭，以蝉花进行临床研究，发现其具有降低血、尿肌酐，提高内生肌酐清除率，改善血清蛋白含量、减少尿蛋白的排出等功能。(10)抗病毒作用，蝉花水煎剂对单纯疱疹病毒具有强烈的抑制效果，在处理非洲绿猴肾细胞研究中，预防效果明显优于治疗效果。

蝉花分布在我国南方安徽、云南、福建、浙江、江西、广东、四川、陕西以及亚洲的热带、亚热带地区。蝉花盛发季节在6月下旬到7月中旬，8～9月份仅有零散分布。蝉花因其药用价值已经被老百姓所广泛认可，但野生蝉花资源的稀缺性和产生的季节性，其产量远不能满足市场需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝉花的仿生培养方法，该方法能够模拟野生生态环境，克服野生蝉花生长周期限制，使生产不受季节限制，而且易于规模化培养和采收，培养出来的蝉花腺苷含量高于野生蝉花。

蝉花仿生培养方法步骤如下：

1.菌株分离：从天然禅花上收集蝉拟青霉Paecilomyces cicadae(Miquel)Samson分生孢子，并对其进行分离纯化；

2.菌株筛选：将步骤(1)分离纯化获得的菌株转接到产子实体培养基上，筛选生长快，子实体产生丰富、粗壮的菌株；

3.孢子培养：将步骤(2)筛选获得的菌株转接到产孢子培养基上，培养并收集分生孢子，将收集到的孢子配制成孢子液；

4.浸染虫体：用步骤(3)制备的孢子液处理感染体；

5.介质培养：将步骤(4)处理得到的感染体埋至介质中培养；

6.收获蝉花。

进一步的，蝉花仿生培养步骤(1)中所述菌株分离包括以下两步：

a)从天然蝉花上收集蝉拟青霉分生孢子；

b)通过平板培养基，对步骤a)中收集得到的蝉拟青霉分生孢子进行菌株纯化，挑菌落生长旺盛，孢子致密，无角变的菌株作为单孢子株系。

较优的，所述平板培养基为马铃薯-蔗糖-琼脂培养基或者马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基。

较优的，蝉花仿生培养步骤(2)中所述子实体培养基为谷类培养基；进一步的，该谷类培养基中包括下列重量份的原料组分：

谷类   30～40

水     60～70。

较优的，谷类培养基中的谷类为大米、小米、玉米、小麦、大麦、高粱或其混合物。

较优的，蝉花仿生培养步骤(3)中产孢子培养基为麸皮-蚕蛹粉培养基；进一步的，该麸皮-蚕蛹粉培养基中包括下列重量份的原料组分：

麸皮   40～50

蚕蛹粉 5～10