[发明专利]利尿中药在制备防治骨质疏松症药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及利尿中药灯芯草、车前草、车前子、白茯苓的新用途，即在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。

背景技术

加尼福尼亚大学骨质研究表明，连续四周每天摄取食盐量为6000毫克的妇女对钙质的吸收量会从原来正常的1500毫克减少了42毫克左右——过量的Na盐摄入会导致血液中钙含量的降低，从而引发骨质疏松症。而上皮钠通道蛋白（epithelial sodium channel，ENaC）通道是调节体内钠盐的膜蛋白，ENaC广泛分布在人体细胞中，调控细胞内的钠离子平衡。上皮钠通道蛋白通道是非电压门控的阿米洛利敏感性异侧离子通道。ENaC由四个同源亚基α、β、γ、δ组成多聚体，多数的结构为复合体。阿米洛利是一种上皮细胞钠离子通道阻滞药，一种作用于肾小管远端ENaC的保钾利尿药。阿米洛利及其衍生物都会抑制上皮细胞钠离子通道。有实验研究发现阿米洛利的衍生物Phenamil的小分子能诱导成骨细胞的分化和矿化。

在我国中药里面有很多具有清热利尿作用（与阿米洛利和Phenamil的利尿作用相似）的药材，但是这方面的药材作为治疗骨质疏松症的用途还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供利尿中药在制备防治骨质疏松症疾病药物中的应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的

针对背景技术中阿米洛利的衍生物Phenamil的小分子能诱导成骨细胞的分化和矿化的启示，我们从利尿中药当中找到了几个和阿米洛利衍生物Phenamil有类似利尿作用的中药来做实验，试验它们是否对成骨细胞有影响。本实验用乳鼠的头盖骨来做成骨细胞，将不同浓度的车前草、车前子、灯芯草、白茯苓培养成骨细胞。观察不同浓度的车前草、车前子、灯芯草、白茯苓对成骨细胞的影响，发现这几味中药具有促进成骨细胞增殖和分化的作用，能够用于制备防治骨质疏松症的药物。

利尿中药在制备促进成骨细胞增殖和/或促进成骨细胞分化的药物中的应用，所述利尿中药为车前草、车前子、灯芯草或白茯苓。

利尿中药在制备抑制OC基因表达、促进Coll-Ia基因表达和/或促进ALP基因表达的药物中的应用，所述利尿中药为车前草、车前子或灯芯草。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明证实了利尿中药对于成骨细胞增殖和分化都具有促进作用，并能上调成骨功能指标基因的表达，对防治骨质疏松症具有一定的治疗作用，提供了利尿中药的新用途，同时为骨质疏松症治疗提供一种新的候选药物。

附图说明

图1. 不同浓度的含药（车前草、灯芯草、白茯苓）血清刺激下成骨细胞增殖影响分析图；

图2. 不同浓度含药（车前子）血清对成骨细胞增殖影响分析图，其中N.S为生理盐水；

图3. 不同浓度的含药（车前草、灯芯草、白茯苓）血清刺激对成骨细胞AKP的影响分析图；

图4. 不同浓度含药（车前子）血清对成骨细胞增殖影响分析图，其中N.S为生理盐水；

图5. 不同浓度的含车前草血清和含灯芯草血清对成骨细胞相关基因表达影响电泳图；

图6.不同浓度的含药（车前子）血清对成骨细胞相关基因表达影响的电泳图。

具体实施方式

实施例1 利尿中药对成骨细胞增殖的影响

1.利尿中药提取液制备

取200g车前草、灯芯草、白茯苓干药材煮两次，第一次加入2L蒸馏水，浸泡5min后加热沸腾30min，过滤，滤渣加入1.2L蒸馏水煎煮，沸腾20min，煮完后再过滤，最终把两次滤液合并，浓缩成200ml，4℃保存待用。

取40g车前子加400ml蒸馏水，浸泡5min，加热沸腾30min，过滤，留滤液与滤渣，回收滤渣，加入400ml蒸馏水煎煮第二次，沸腾20min，过滤，留滤液。将两次所得的滤液浓缩成400mL，4℃保存待用。

2.含药血清制备

分别用浓度为1mg/mL的车前草、灯芯草、白茯苓提取液、生理盐水1日2次灌胃大鼠（早上9：00、傍晚17：00），每次灌量1 mL/100g。连续3.5 d。最后一次灌胃1小时后，动物给予乙醚麻醉，心脏穿刺取血，将大鼠血以4000 rpm离心15min取血清，每组血清摇匀，-80℃保存，用时过滤除菌，用无血清DMEM配成所需浓度的含药血清培养基。

3. 成骨细胞培养