[发明专利]一种15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法

权利要求书

1.一种15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，包括雷斯青霉Penicillium raistrickii(ATCC 10490)发酵、加入底物左旋乙基甾烯双酮进行生物转化，其特征在于：所述生物转化的体系由离子液体和缓冲液相构成，其中离子液体相和缓冲液相的体积比为0.25～1.25∶1。

2.根据权利要求1所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，其特征在于：所述离子液体包括[BMIM][PF6]、[HMIM][PF6]、[BMIM][NTF2]、[HMIM][NTF]、[BMPL][NTF]、[HMPL][NTF]、[BMPL][FAP]、[HMIM][FAP]、[EWTMG][FAP]、[(E2OH)MIM][NTF]、[(EOE)MMO][NTF]、[(MOP)MPI][NTF]、[(P3OH)PYR][NTF]；所述缓冲液相为pH5～7.3的磷酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，其特征在于：所述底物左旋乙基甾烯双酮进行生物转化的底物投料量的重量百分比为2～7‰，温度为25～30℃，摇床转速为160～200r/min，转化时间为90～100h。

4.根据权利要求1所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，其特征在于：所述雷斯青霉Penicillium raistrickii(ATCC 10490)发酵步骤为：

(1)孢子悬液的制备：将雷斯青霉Penicillium raistrickii(ATCC 10490)接种到斜面培养基上，经培养后用无菌水，含量为质量百分比1‰的Tween-80水溶液，将斜面孢子洗下，制备出孢子悬液；

(2)菌丝培养：将已制备好的孢子悬液接入到发酵培养基中，培养温度28～32℃，接种量为10⁸～10¹¹个/ml，摇床转速为160～200r/min，培养时间为24～72h；培养成熟后所得球状菌丝体经抽滤获得菌饼。

5.根据权利要求4所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，其特征在于：所述菌饼投入到离子液体/水两相系统的水相中的菌球重量占水相质量的5～8％。

6.根据权利要求4所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，其特征在于：所述斜面培养基wt％：葡萄糖1.5，麦芽糖2，蛋白胨0.1，琼脂2，pH自然；所述发酵培养基wt％：葡萄糖3，玉米浆1，NaNO₃0.2，KH₂PO₄0.1，MgSO₄0.05，FeSO₄0.002，KCl 0.05，K₂HPO₄0.2，pH 7.2～7.5。

7.根据权利要求4所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的制备方法，其特征在于：所述将抽滤得到的菌饼投入到缓冲液相中，再加入离子液体，同时以干粉投料的方式将底物投入到离子液体/缓冲液相系统中进行微生物转化。