[发明专利]低分子水产胶原蛋白肽的制备方法

权利要求书

1.一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，按以下步骤进行：

步骤1，鱼鳞脱灰：

选取干鱼鳞，清洗，在常温条件下，用浓度为4％-35％的盐酸浸泡搅拌10～50min，进行脱灰，然后用蒸馏水反复清洗，除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙，得到脱灰的鱼鳞；

步骤2，利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白：

取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞，当清洗液的pH值为6.2～7.0时停止清洗；将鱼鳞沥干水分，用当量浓度为0.1N的氢氧化钠溶液对鱼鳞脱脂8～24h，然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞，当清洗液的pH值为7.0～8.0停止清洗；将清洗后的鱼鳞放入蒸馏水中，控制脱灰、脱脂后的鱼鳞与蒸馏水的重量比为1∶5～8，然后在90℃～125℃温度下热水浸提1～3h，过滤，回收滤液，滤液为水溶性胶原蛋白；

步骤3，制备碱性酶酶解蛋白肽溶液：

分别取氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶，将氢氧化钠溶液加入步骤2得到的水溶性胶原蛋白溶液中，调节该水溶性胶原蛋白溶液的pH值为9～11，再往水溶性胶原蛋白溶液中加入碱性蛋白酶，控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为0.5％～2％，并在30～60℃的温度下，搅拌酶解8～48小时，接着在98℃～115℃温度下加热10分钟～15分钟，使碱性蛋白酶失去活性，制得碱性酶酶解蛋白肽溶液；

步骤4，制备中性酶酶解蛋白肽溶液：

分别取盐酸溶液和中性蛋白酶，将盐酸溶液加入步骤3得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中，调节该蛋白肽溶液的pH值为6.5～8，再往该蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基质比为0.5％～2％，并在40～55℃的温度下，搅拌酶解8～48小时，接着在98℃～115℃温度下加热10分钟～15分钟，使中性蛋白酶失去活性，制得中性酶酶解蛋白肽溶液；

步骤5，制备酸性酶酶解蛋白肽溶液：

分别取盐酸溶液和酸性蛋白酶，将盐酸溶液加入步骤4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中，调节该蛋白肽溶液的pH值为2.5～5.0；再往该蛋白肽溶液中加入酸性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基质比为0.5％～2％，并在30～55℃的温度下搅拌酶解8～48小时，接着在98℃～115℃温度下加热10分钟～15分钟，使酸性蛋白酶失去活性，制得酸性酶酶解蛋白肽溶液；

步骤6，活性炭过滤进行脱色、脱腥：

取酸性酶酶解蛋白肽溶液质量1～5％的食品用粉末状活性碳，加入步骤5得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中，搅拌均匀，加热至40～80℃的条件下，保温30～60min，然后真空过滤，获得澄清的胶原蛋白滤液；

步骤7，大孔树脂处理进一步脱色：

取大孔树脂用乙醇溶液浸泡24h，然后用蒸馏水反复清洗，再用蒸馏水浸泡，确认无残留乙醇后，将大孔树脂添加到分离柱中，接着将步骤6得到的胶原蛋白滤液按100ml/h·60dm³树脂～250ml/h·60dm³树脂的流速通过大孔树脂分离柱，除去活性碳难以吸附的残留色素，回收分离液，将分离液经0.45μm膜过滤后，再用截流分子量5000Da的超滤膜过滤，回收滤液，滤液为澄清透明的酶解蛋白肽脱色溶液；

步骤8，制得胶原蛋白肽：

将步骤7制得的酶解蛋白肽脱色溶液，进行喷雾干燥，制得高白度的胶原蛋白肽。

2.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述碱性蛋白酶为Bacillus subtirus、Aspergillus melleus或Bacillus licheniformis微生物来源的碱性蛋白酶。

3.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述中性蛋白酶为Bacillus subtilis、Bacilluse Stearothermophi、Aspergillus oryzae、Bacillus amyloliquefaciens、木瓜酶或胰腺酶的微生物和动、植物来源酶。

4.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述酸性蛋白酶为Aspergillus niger或Rhizopus niveus的微生物来源酶或动物胃蛋白酶。

5.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1中，利用氢氧化钠溶液对鱼鳞进行脱脂的具体方法为：将脱灰湿鱼鳞放入当量浓度为0.1N的氢氧化钠溶液中，用搅拌器以60转/分的转速搅拌8-24h，除去鱼鳞的脂肪和杂蛋白；其中，1.5ml当量浓度为0.1N的氢氧化钠溶液中加入0.258g脱灰湿鱼鳞。