[发明专利]针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的制备方法

权利要求书

1.一种针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的制备方法，包括下述步骤：

(1)、多肽的制备：在狂犬病病毒核蛋白第152到164位氨基酸区段的N端加C，得到多肽CKISGQNTGNYKTN；

(2)、免疫原的制备：将多肽与已活化的KLH进行耦联，得到免疫原；

(3)、初次免疫：取免疫原与弗氏完全佐剂充分乳化，对Balb/c小鼠腹部多点皮下注射免疫；

(4)、第一次强化免疫：初次免疫3周后，取免疫原与弗氏不完全佐剂充分乳化，对Balb/c小鼠腹部多点皮下注射免疫；

(5)、第二次强化免疫：初次免疫5周后，取免疫原与弗氏不完全佐剂充分乳化，对Balb/c小鼠腹部多点皮下注射免疫；

(6)、杂交瘤细胞株的筛选：取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合，对融合后细胞采用间接ELISA和IFA双重筛选，选择阳性的克隆进行亚克隆，得到产生所述针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的杂交瘤细胞株。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括针对狂犬病病毒核蛋白保守线性表位肽的单抗的纯化和标记步骤，所述纯化和标记步骤为：将步骤(6)获得的杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c小鼠，对腹水用DEAE-Sephadex A-50进行柱层析，然后采用FITC进行标记。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的KLH活化过程为：将KLH与交联剂SMCC混合，室温旋转反应30min，使KLH充分活化，用多肽偶联缓冲液平衡的SephadexG-25柱层析除去游离成分，得到活化的KLH。

4.根据权利要求1～3中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于，所述免疫原是将多肽加入已活化的KLH中室温下旋转反应2小时，耦联好的产物即为免疫原。