[发明专利]一种毛细管电泳-化学发光法检测非衍生氨基酸的方法及其检测装置

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，特别涉及一种毛细管电泳-化学发光法检测非衍生氨基酸的方法及其检测装置。

背景技术

生物体内氨基酸的水平反映了生物体中的许多生命现象，并和许多疾病密切相关。因此，氨基酸的检测在临床诊断和临床基础研究中具有重要的意义。然而，由于这类化合物缺乏紫外吸收、荧光活性以及电化学活性，大多分析方法需要对这类化合物进行衍生，虽可以获得较好的灵敏度，但是操作繁琐，定量测定受衍生情况影响较大。化学发光(CL)法检测具有灵敏度高，结构简单，不需要任何外加光源等特点，近年来毛细管电泳检测受到人们的关注。目前，有以下几种发光体系应用到氨基酸的检测中：(1)过氧化草酸盐发光反应测定氨基酸荧光衍生物。这种方法虽可获得较高的灵敏度，但是仍需要衍生，且操作复杂，条件苛刻。(2)鲁米诺-次溴酸盐发光体系，在碱性条件下，氨基酸会抑制鲁米诺-次溴酸盐发光反应，以发光信号的衰减测定氨基酸的含量这种方法操作简便，但灵敏度受限。这种方法操作简便，但灵敏度受限。(3)鲁米诺-过氧化氢发光体系，氨基酸可与铜离子形成络合物，并催化化学发光活性。由于铜离子本身能有效催化发光反应，因此具有较高的发光背景，致使灵敏度不高。因此，发展一种操作简便、灵敏度高的发光体系用于测定非衍生氨基酸将是十分必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是针对现有的毛细管电泳-化学发光法检测氨基酸的方法存在操作繁琐、灵敏度低的缺陷，提供一种操作简单、灵敏度高的毛细管电泳-化学发光法检测非衍生氨基酸的方法，及其检测装置。

本发明的技术方案如下：一种毛细管电泳-化学发光法检测非衍生氨基酸的方法，包括以下步骤：

(1)采用下述(i)～(iii)中的任何一种进行发光体系的混合：

(i)将纳米氧化铜和鲁米诺添加于毛细管电泳的流动相中，再将过氧化氢溶液在电泳毛细管柱的柱后通过化学发光检测池的T型通道进行添加；

(ii)先将鲁米诺溶液添加于流动相中，然后将纳米氧化铜和过氧化氢溶液在电泳毛细管柱的柱后分别通过化学发光检测池的两个T型通道进行添加；

(iii)分别将纳米氧化铜和鲁米诺-过氧化氢混合液在电泳毛细管柱的柱后的化学发光检测池的两个T型通道进行添加；

(2)走基线，在化学发光检测池中测光信号，至系统稳定；然后

(3)进氨基酸样品，进行毛细管电泳分离和光信号输出。

其中为实现对非衍生氨基酸检测，该流动体系中的发光体系各物质浓度如下：纳米氧化铜1×10^-4～1×10^-2mol/L，鲁米诺1×10^-5～1×10^-3mol/L，过氧化氢1×10^-3～1×10^-1mol/L。最佳为：纳米氧化铜1×10^-3mol/L，鲁米诺5×10^-4mol/L，以及过氧化氢1×10^-1mol/L。其中，纳米氧化铜较佳的是采用低热固相配位化学反应热分解制备的纳米氧化铜，粒径＜10nm。

本发明中，上述步骤(1)是本发明特别改良的，步骤(2)和(3)则是常规的毛细管电泳-化学发光法所用的方法。

在纳米氧化铜粒子粒径均一，不影响实际样本的分离的情况下，以第(i)种发光体系混合方式为优。不然以第(ii)种发光体系混合方式为好。

上述检测方法较佳的采用本发明提供的毛细管电泳-化学发光检测装置进行。该装置的结构如图1。其中，所用的部件都是常规部件，除了毛细管柱后化学发光检测池是本发明特别设计的。

因此本发明的技术方案还包括：一种毛细管电泳-化学发光法检测非衍生氨基酸的毛细管柱后化学发光检测池，包括：两个T型发光试剂加样通道，两者距离为2～5cm，以2.5cm为宜；第一T型发光试剂加样通道，距分离毛细管柱后1cm；第二T型发光试剂加样通道与PMT检测窗口的距离大于0.5cm，2cm左右为宜。PMT检测窗口0.5～1cm，以1cm为宜。该两个T型发光试剂加样通道内径为50～320μm，以100μm为宜。

该毛细管柱后化学发光检测池能够用于上述第(i)至(iii)种发光体系混合方式，尤其适合用于第(ii)种发光体系混合方式。