[发明专利]一种高效去除腐殖质的环境样品总DNA提取方法无效

申请号：	201110178774.X	申请日：	2011-06-29
公开（公告）号：	CN102286463A	公开（公告）日：	2011-12-21
发明（设计）人：	赵吉;李靖宇;于景丽;武琳慧	申请（专利权）人：	内蒙古大学
主分类号：	C12N15/10	分类号：	C12N15/10
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	010021 内蒙古***	国省代码：	内蒙古;15
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摘要：
搜索关键词：	一种高效去除腐殖质环境样品 dna 提取方法
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【权利要求书】：

1.一种高效去除腐殖质的环境样品总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取0.3g过筛的土样于装有三颗2.5mm-3.0mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中，加入1mL脱腐缓冲液(100mmol/L Tris，100mmol/L Na₄P₂O₇，100mmol/L Na₂EDTA，1.0％PVP，100mmol/L NaCl，0.05％Triton X-100，pH 10.0)，Vortex-Genie2(MobioLaboratories Inc)涡旋1min，12000r/min离心2min，弃上清；

(2)加入1mL 0.5mol/L的氯化钙溶液，Vortex-Genie2(Mobio Laboratories Inc)涡旋2min，12000r/min离心1min，弃上清；

(3)加入800μL DNA提取缓冲液(100mmol/L Tris-HCl，1.5mol/L NaCl，1％CTAB，pH 8.0)，Vortex-Genie2(Mobio Laboratories Inc)涡旋5s；

(4)加入200μL SDS溶液(20％)，颠倒混匀，65℃温育10min，5min颠倒混匀一次。；

(5)取上清900μL于2mL离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，12000r/min离心5min；

(6)取上清800μL于2mL离心管中，加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)，12000r/min离心5min；

(7)取上清600μL于1.5mL离心管中，加入0.6倍体积的异丙醇，冰浴20min，12000r/min离心5min；

(8)弃上清，用70％的酒精洗沉淀，自然干燥或冷冻干燥；

(9)50μL TE溶解沉淀。

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