[发明专利]耧斗菜组培培养基及快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种耧斗菜组培培养基及快速繁殖方法。

背景技术

耧斗菜花色鲜艳，花形大，花期较长，因其花瓣上端开展，而5个花瓣末端形成的5个距向中心集中，形似漏斗而得名。耧斗菜因其奇特的花形，艳丽的花色而受到人们喜爱，具有较高的观赏价值。

目前耧斗菜繁殖方法主要为播种繁殖和分株繁殖。播种繁殖对发芽温度要求严格，一般为15℃～20℃，温度过高则不易发芽，并且播种苗2年后才可以开花。分株繁殖不仅对植株大小有一定要求，而且需要大量人力和时间。现有的两种繁殖方法不仅繁殖周期较长，要求大量的种子和植株，并且耧斗菜栽培3年后植物易退化，这就需要寻找一种快速高效的耧斗菜繁殖方法，满足该花卉的大规模工厂化生产需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供了一种适用于耧斗菜组织培养的培养基以及利用该培养基快速繁殖耧斗菜的方法。采用本发明的组培培养基和方法，增殖培养15天后，芽增殖率达95％以上，增殖频率不低于2.0，生根培养10天左右，部分幼苗基部产生白色根，培养20天后，大部分幼苗均长出根，生根率达92％以上，移栽成活率达100％，组培苗移栽当年即能开花。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种耧斗菜组培培养基，其特征在于，各阶段培养基添加物含量分别为：

不定芽诱导培养基：每升MS常规基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤0.5mg～3.0mg(优选1.0mg～2.0mg，进一步优选1.0mg)、萘乙酸0.1mg～0.5mg(优选0.2mg～0.3mg，进一步优选0.3mg)、2，4-二氯苯氧乙酸0.2mg～0.4mg(优选0.25mg～0.35mg，进一步优选0.3mg)、蔗糖20g～40g(优选25g～35g，进一步优选30g)和琼脂4g～8g(优选5g～6g，进一步优选6g)；所述不定芽诱导培养基的pH值为5.8～6.0；

增殖培养基：每升MS常规基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤0.5mg～3.0mg(优选1.0mg～2.0mg，进一步优选2.0mg)、萘乙酸0.1mg～0.5mg(优选0.2mg～0.3mg，进一步优选0.2mg)、蔗糖20g～40g(优选25g～35g，进一步优选30g)和琼脂4g～8g(优选5g～6g，进一步优选6g)；所述增殖培养基的pH值为5.8～6.0；

生根培养基：每升MS常规基本培养基中添加活性炭0.1g～1g(优选0.2g～0.8g，进一步优选0.5g)、蔗糖10g～40g(优选20g～30g，进一步优选20g)和琼脂4g～8g(优选5g～6g，进一步优选6g)；所述生根培养基的pH值为5.8～6.0。

本发明还提供了一种耧斗菜的快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下具体步骤：

(1)将灭菌的耧斗菜幼嫩茎端切割后做为外植体，在无菌条件下将外植体接种于不定芽诱导培养基上，培养20天时诱导出不定芽，继续培养10天；然后在无菌条件下将不定芽切割后接种于增殖培养基上培养30天；再在无菌条件下将增殖培养后的不定芽转接于生根培养基上培养20天，获得耧斗菜组培苗；以上培养条件均为：温度25±2℃，12h光照与12h黑暗交替培养，光照强度为35μmol·m^-2s^-1～40μmol·m^-2s^-1；

(2)待步骤(1)中所述组培苗长至2cm～3cm高，开瓶练苗3天～5天，再移栽到素沙与草炭的质量比为2∶1的栽培介质中，得到耧斗菜再生植株。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明的组培培养基针对性强、适用性好，外植体经不定芽诱导培养基培养20天时即诱导出不定芽，30天后可见分化出的芽增大长高，芽的诱导率达到70％以上，增殖培养15天后，芽增殖率达95％以上，增殖频率不低于2.0，生根培养10天左右，部分幼苗基部产生白色根，培养20天后，大部分幼苗均长出根，生根率达92％以上，移栽成活率达100％，组培苗移栽当年即能开花。

2、本发明的方法不受季节限制，可常年生产耧斗菜组培苗，并可实现耧斗菜组培苗的规模化生产。

下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

具体实施方式

实施例1

本实施例中各阶段培养基添加物含量分别为：