[发明专利]一种银杏叶中总黄酮和总内酯的提取分离方法

权利要求书

1.一种银杏叶中总黄酮和总内酯的提取分离方法，其特征在于，所述方法主要包括以下步骤：

1)提取

所述提取包括：称取银杏叶，加入占银杏叶重量8-12倍、体积浓度为10％-50％低碳醇，在20℃-50℃下浸泡提取2-5次，每次1-5天，将提取液合并，并将提取液浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；

2)醇沉

所述醇沉包括：在步骤1)获得的浸膏中加入低碳醇，使低碳醇体积浓度达到50-70％，并充分搅拌，0-4℃冷藏静置12-48小时，随后分离除去固体、胶体等，将获得的液体浓缩至相对密度为1.10-1.25的浸膏；再加入低碳醇使低碳醇体积浓度达到70％-90％，并充分搅拌，0-4℃冷藏静置12-48小时后再次分离除去固体、胶体等，将获得的液体浓缩挥发除去低碳醇，浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；

3)水沉

所述水沉包括：将醇沉后的浸膏按照1∶5-1∶10的体积比加入水，充分搅拌，0-4℃冷藏静置24-240小时，随后分离除去固体、胶体等，将获得的液体中的固体物质去除后，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏；

4)大孔树脂分离

所述大孔树脂分离包括：将水沉完的浸膏上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1∶5-1∶50，分别采用水、体积浓度10-30％的低碳醇、体积浓度30-60％低碳醇和60-90％低碳醇洗脱，每次洗脱的体积为3-6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；收集10-30％低碳醇和60-90％低碳醇洗脱组分，合并洗脱液并浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏；

5)硅胶基质键合材料分离

所述硅胶基质键合材料分离包括：以粒径10-100微米的硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的低碳醇水溶液作为洗脱液，低碳醇的体积浓度从10-70％变化，收集目标洗脱组分，干燥处理即为银杏叶中总黄酮和总内酯类化合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，

所述银杏叶优选含水量为1％-10％的银杏叶；

所述乙醇的加入量优选占银杏叶重量9-11倍，更优选9-10倍；

所述乙醇的体积浓度优选为20％-45％，更优选30％-40％；

所述浸泡温度优选为30℃-50℃，更优选30℃-40℃；

所述提取次数优选2-4次，更优选3-4次；

所述每次浸泡时间优选1-4天，更优选2-4天；

所述低碳醇优选甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物，更优选甲醇和乙醇，进一步优选乙醇。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中，

所述分离除去固体、胶体等操作优选采用过滤操作；

所述冷藏静置时间优选15-36小时，更优选24-36小时；

所述低碳醇优选甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物，更优选甲醇和乙醇，进一步优选乙醇。

4.如权利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，步骤3)中，

所述体积比优选1∶6-1∶9，更优选1∶7-1∶8；

所述冷藏静置时间优选36-192小时，更优选72-120小时；

所述分离除去固体、胶体等操作优选采用过滤操作；

所述将获得的液体中的固体物质去除优选采用离心分离，所述离心分离优选采用离心机离心分离，所述离心机优选10000-25000转/分钟的高速离心机；

或所述将获得的液体中的固体物质去除采用过滤后进行微滤。

5.如权利要求1-4之一所述的方法，其特征在于，步骤4)中，

所述上样量与分离材料体积比优选为1∶10-1∶40，更优选1∶15-1∶30；

所述低碳醇优选甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物，更优选甲醇和乙醇，进一步优选乙醇。

6.如权利要求1-5之一所述的方法，其特征在于，步骤5)中，

所述硅胶基质键合材料的粒径优选40-100微米，更优选40-70微米；

所述低碳醇优选甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其混合物，更优选甲醇和乙醇，进一步优选甲醇。

7.一种银杏叶中总黄酮和总内酯的提取分离制备方法，所述方法包括：

1)提取：称取含水量为1％-10％的银杏叶，加入其重量8-12倍、浓度为10％-50％乙醇，20-50℃浸泡提取2-5次，每次1-5天，合并提取液，将提取液浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；

2)醇沉：将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70％，并充分搅拌，0-4℃冷藏静置12-36小时，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到70-90％，并充分搅拌，0-4℃冷藏静置12-48小时过滤，将滤液浓缩挥发除去乙醇，浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；

3)水沉：将醇沉完的浸膏中按照1∶5-1∶10的体积比加入水，充分搅拌，0-4℃冷藏静置24-240小时，过滤，样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心，样品浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏；

4)大孔树脂分离：将水沉完的浸膏上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1∶5-1∶50，分别采用水、体积浓度10-30％乙醇、体积浓度30-60％乙醇和60-90％乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3-6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；收集10-30％乙醇和60-90％乙醇洗脱组分，合并洗脱液并浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏；

5)硅胶基质键合材料分离：以粒径10-100微米的硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，对大孔树脂分离得到的浸膏进行洗涤，甲醇的体积浓度从10-70％变化，收集目标洗脱组分，干燥处理即为银杏叶中的总黄酮和总内酯类化合物。