[发明专利]检测环孢霉素A药物浓度的化学发光酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测试剂，特别是一种检测环孢霉素A药物浓度的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

环孢霉素A(cyclosporin A)是一种从真菌中提取，由瑞士山德士药厂1976年首次发现并报告有免疫抑制作用的药物。同年英国剑桥的R.Calne在动物的器官移植上应用取得了令人难忘的结果，并于1978年成功地试用于临床肾脏移植和骨髓移植。环孢霉素A的出现对器官移植的发展起了巨大的推动作用，如今被称之为“器官移植的环孢霉素”，是目前最常用的免疫抑制剂，也用于自身免疫疾病的治疗。其主要作用是通过可选择性地抑制免疫应答，有选择性地抑制活性T细胞增殖依赖的细胞因子IL-2，致使T细胞分化、发育产生障碍，从而保护移植物(器官)免遭T细胞毒性作用的破坏，而对其他的免疫细胞的抑制作用则相对较弱。

在临床上，环孢霉素A的使用剂量、血药浓度与疗效、药物毒性密切相关，在高血浓度时有一定的毒性，主要是神经毒性和肾毒性。因此临床使用需要制定合理的用药方案，经常测定血中环孢霉素A的浓度来监测环孢霉素A的用量是否合适。

为达到个体化给药方案，避免毒副反应和排斥反应的发生，在有条件的医院都将监测其血药浓度列为了常规工作，目前测定全血中环孢霉素A浓度的方法主要有两大类：高效液相色谱法和免疫标记分析法。

高效液相色谱法是70年代发展起来的一种测定血药浓度的物理方法，采用特殊装置的柱色谱法，利用同一种吸附剂对不同物质吸附能力的差别进行分离鉴定，其特异性高，只测定环孢霉素A母药的浓度而不测定其代谢物的浓度，结果准确可靠，但其样本前处理操作繁琐，且需特殊的技术和昂贵的设备以及高素质的专业技师进行操作，一定程度上妨碍其深入开展和普及。

免疫标记分析法是以抗原或半抗原与抗体之间特异性亲和反应为基础的免疫标记技术目前用于测定血药浓度的免疫分析法常用的标记物有放射性核素、荧光剂和酶三大类，其测定技术分别称为放射免疫分析法(Radioimmunoassay，RIA)、荧光免疫分析法(Fluoroimmunoassay，FPIA)和酶免分析法(Enzyme immunoassay，EIA)。他们共同的优点是特异性强、灵敏度和精密度高、准确性好、简便、快速，易实现自动化，适用于常规和急诊工作。放射免疫测定法虽然具有高灵敏度、高特异性的优点，但其操作步骤较多，需要特殊的检测设备，并且使操作人员受到放射性危害，同时试剂盒的使用期限也会受标记的放射性物质的衰变期的限制，故近年来许多本来使用RIA测定的药物多已改用其他免疫分析方法。荧光偏振免疫测定法是基于待测物和联接了荧光的待测物对特定的待测物抗体上有限的受体结合位点的竞争性结合。当待测样品中存在能与抗体结合的药物时，将形成无荧光药物-抗体复合物，从而引起偏振度的下降，根据该偏振度下降的程度即可确定出样品中待测物的浓度。该法灵敏度高，选择性好，但缺点是需要特殊的检测设备，价格较为昂贵，操作也不太方便。酶免法是用酶代替荧光体标记抗原或抗体，利用该酶的底物显色的程度来确定样品中药物的浓度。

化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性、灵敏性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏度，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。

现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛的应用于临床诊断和科研工作。本发明的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既可以应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快速检测，适用成本低，更易推广应用。

发明专利内容

本发明根据上述领域的缺陷及国内现状，特别是一种能够简便、快速、灵敏、稳定的检测血中环孢霉素A药物浓度的试剂盒，适用于国内检测仪器。

检测环孢霉素A药物浓度的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括：抗环孢霉素A的特异性单克隆抗体或抗抗体包被的酶标板，酶标记的环孢霉素A半抗原；或与载体蛋白偶联的环孢霉素A半抗原包被的酶标板，酶标记的抗环孢霉素A的特异性单克隆抗体或抗抗体；其特征在于所述用于包被酶标板的环孢霉素A半抗原和酶标记的环孢霉素A半抗原采用以下处理方法制备而得：