[发明专利]葡聚糖—胍基丁胺聚阳离子转基因载体及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201110185847.8 | 申请日： | 2011-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN102337296A | 公开（公告）日： | 2012-02-01 |
| 发明（设计）人： | 刘文广;杨建海;王宏博 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A61K48/00;A61K47/36;C08B37/02 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 王秀奎 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 聚糖 胍基丁胺聚 阳离子 转基因 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体，以葡聚糖分子为主链，其特征在于，利用主链上的羟基将胍基丁胺键接到葡聚糖分子主链上，形成如下述化学式所示的分子结构：
2.制备权利要求1所述的葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体的方法，其特征在于，按照下述步骤进行制备：首先利用对甲苯磺酰氯改性葡聚糖，得到对甲苯磺酰化葡聚糖，然后将胍基丁胺与对甲苯磺酰化的葡聚糖溶于水中，并加入三乙醇胺，在惰性气体保护下进行反应，即得到葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，葡聚糖、对甲苯磺酰氯的比例为等摩尔比或者1∶(11-1.2)，在20-30℃下反应3-6小时。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，胍基丁胺和三乙醇胺的用量基本相等，且都大于对甲苯磺酰化的葡聚糖的用量，在80-90℃下反应至少24小时。
5.脂肪酸修饰的葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体，以葡聚糖分子为主链，其特征在于，利用主链上的羟基分别将胍基丁胺和脂肪酸键接到葡聚糖分子主链上，形成如下述化学式所示的分子结构：
其中n为1-15。
6.根据权利要求5所述的脂肪酸修饰的葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体，其特征在于，n为10-15。
7.制备权利要求5所述的脂肪酸修饰的葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体的方法，按照下述步骤进行制备：
首先利用对甲苯磺酰氯改性葡聚糖，得到对甲苯磺酰化葡聚糖；
然后将脂肪酸和羰基二咪唑进行反应；
再将脂肪酸和羰基二咪唑的反应产物加入到对甲苯磺酰化葡聚糖溶液中，进行反应，即得脂肪酸修饰的对甲苯磺酰化葡聚糖；
最后将胍基丁胺与脂肪酸修饰的对甲苯磺酰化葡聚糖溶于水中，并加入三乙醇胺，在惰性气体保护下进行反应，即得到脂肪酸修饰的葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，
首先利用对甲苯磺酰氯改性葡聚糖时，葡聚糖、对甲苯磺酰氯的比例为等摩尔比或者1∶(11-1.2)，在20-30℃下反应3-6小时；
然后脂肪酸和羰基二咪唑进行反应时，将脂肪酸和羰基二咪唑分别用有机溶剂溶解，并将羰基二咪唑的溶液加入脂肪酸中，两者等摩尔比，在80-90℃下反应3-6小时；
第三、将对甲苯磺酰化葡聚糖溶于有机溶剂，并向其中加入脂肪酸和羰基二咪唑反应后的溶液，在80-90℃下反应6-24小时，然后用乙醇沉淀产物，冲洗，抽滤，透析后冻干，即得脂肪酸修饰的对甲苯磺酰化葡聚糖；
进行最后一步时，胍基丁胺和三乙醇胺的用量基本相等，且都大于脂肪酸修饰的对甲苯磺酰化葡聚糖的用量，优选80-90℃下反应至少24小时；待反应结束后，将溶液pH调到7，透析后冻干，即得到脂肪酸修饰的葡聚糖-胍基丁胺聚阳离子转基因载体。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述脂肪酸为月桂酸。
10.如权利要求1或者5所述的转基因载体，在基因转染领域的应用。
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