[发明专利]家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂靶标抗性的分子检测方法

权利要求书

1.一种家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂靶标抗性的分子检测方法，包含下列步骤：

(1)提取单头家蝇基因组DNA；

(2)对家蝇钠离子通道基因1014位点抗性相关变异进行分子检测；

(3)对家蝇钠离子通道基因918位点抗性相关变异进行分子检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述家蝇钠离子通道基因序列选自SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13和SEQ IDNO：14。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述家蝇钠离子通道基因1014位点抗性相关变异为L1014F或L1014H。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述家蝇钠离子通道基因918位点抗性相关变异为M918T。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，使用PCR方法对家蝇钠离子通道基因1014位点和918位点抗性相关变异进行分子检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，步骤(2)中使用了下列5种PCR引物：

PF：正向通用外引物，序列如SEQ ID NO：1所示；

PR：反向通用外引物，序列如SEQ ID NO：2所示；

PL：1014L敏感基因特异性引物，序列如SEQ ID NO：3所示；

PF：1014F抗性基因型特异性引物，序列如SEQ ID NO：4所示；

PH：1014H抗性基因型特异性引物，序列如SEQ ID NO：5所示。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，步骤(2)中每个个体设置3个PCR反应A1、A2和A3，其分别使用下列3种不同的引物混合物：

A1：PF+PR+PL，1∶1∶3混合；

A2：PF+PR+PF，1∶1∶3混合；

A3：PF+PR+PH，1∶1∶3混合。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，步骤(2)的PCR反应程序为：94℃3min；94℃30s，60℃30s，72℃30s，35个循环；72℃10min。

9.根据权利要求5-8任一项所述的方法，其中，步骤(3)中使用了下列4种PCR引物：

S1：序列如SEQ ID NO：6所示；

S2：序列如SEQ ID NO：7所示；

S3：序列如SEQ ID NO：8所示；

S4：序列如SEQ ID NO：9所示。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，步骤(3)的PCR反应中引物S1、S2、S3和S4的混合比例为1∶1∶3∶3。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中，步骤(3)的PCR反应程序为：94℃3min；94℃30s，50℃30s，72℃30s，30个循环；72℃10min。

12.权利要求1-11任一项的方法在家蝇抗药性检测中的应用。

13.一种用于家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂靶标抗性检测的试剂盒，包括：

(1)用于提取单头家蝇基因组DNA的试剂；

(2)用于对家蝇钠离子通道基因1014位点抗性相关变异进行分子检测的试剂；

(3)用于对家蝇钠离子通道基因918位点抗性相关变异进行分子检测的试剂。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述家蝇钠离子通道基因序列如SEQ ID NO：10，11，12，13和14所示。

15.根据权利要求13或14所述的试剂盒，其中，用于对家蝇钠离子通道基因1014位点抗性相关变异进行分子检测的试剂包括下列5种PCR引物：

PF：正向通用外引物，序列如SEQ ID NO：1所示；

PR：反向通用外引物，序列如SEQ ID NO：2所示；

PL：1014L敏感基因特异性引物，序列如SEQ ID NO：3所示；

PF：1014F抗性基因型特异性引物，序列如SEQ ID NO：4所示；

PH：1014H抗性基因型特异性引物，序列如SEQ ID NO：5所示。

16.根据权利要求13-15中任一项所述的试剂盒，其中，用于对家蝇钠离子通道基因918位点抗性相关变异进行分子检测的试剂包括下列4种PCR引物：

S1：序列如SEQ ID NO：6所示；

S2：序列如SEQ ID NO：7所示；

S3：序列如SEQ ID NO：8所示；

S4：序列如SEQ ID NO：9所示。