[发明专利]一种制备高纯度桑根酮D的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种制备高纯度桑根酮D的方法。

背景技术

桑根酮D为黄酮类物质，分子式C₄₀H₃₆O₁₂，分子量708.7，分子结构式：

桑根酮D，黄色粉末，熔点175-185℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮等，不溶于水、氯仿、二氯甲烷、正己烷、苯等，微溶于乙醚、乙酸乙酯。桑根酮D具有降血压、抑菌、抗癌、治疗心脏病和动脉粥样硬化作用。

现有从桑白皮中制备高纯度桑根酮D方法，多是采用硅胶柱、聚酰胺柱或制备液相分离。如路向红等人发表的“从桑白皮中提取药物成分桑根酮D”，该文献采用的方法为：丙酮提取，正己烷洗涤，乙醚萃取，两次硅胶柱分离。但是传统的柱层析分离，会造成产品死吸附，产品收率低，而且操作复杂，而制备液相分离制备量小。

发明内容：

本发明的目的克服现有技术的不足，提供一种制备高纯度桑根酮D的方法，该方法利用高速逆流色谱分离，操作简单，收率高。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种制备高纯度桑根酮D的方法，其特征在于包含以下步骤：

1) 取桑白皮药材粉碎，加6-10倍量80-90%乙醇溶液回流提取2-3次，提取液浓缩调酸沉淀，沉淀物用丙酮溶解加入聚酰胺树脂拌样烘干，装入聚酰胺树脂柱，甲醇溶液梯度洗脱，薄层检测，收集目标成分调酸结晶，得粗结晶；

2）将上述粗结晶采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，根据图谱收集目标成分，流分减压回收试剂，干燥即得高纯度桑根酮D。

所述步骤1）中的甲醇水溶液梯度为先取4-6BV30-50%甲醇洗脱杂质再取60-70%甲醇有效成分。

所述步骤2）中的高速逆流色谱溶剂系统可选氯仿、甲醇、水溶剂系统，混合比5-10:3-7:2-5，取上相做流动相，下相做固定相。

本发明的优点是采用高速逆流色谱法，这种方法是液液分配色谱，不产生死吸附，分离过程产品不损失，配合紫外检测器在线监测，操作简单，制备周期短，制备量较大，可连续化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

取桑白皮药材粉碎，称量5kg，投入200L不锈钢提取罐，加10倍量80%乙醇溶液回流提取2小时，提取2次，提取液浓缩无醇调酸沉淀，沉淀物用丙酮溶解加入200g聚酰胺树脂拌样烘干，装入聚酰胺树脂柱，先取6BV30%甲醇洗脱杂质，再取70%甲醇有效成分，薄层检测，收集高浓度流分，调pH3结晶，滤出得粗结晶12g。取氯仿、甲醇、水，按5∶3∶2比例在分液漏斗中充分混合，取下相用充满高速逆流色谱柱中做固定相，转动主机，转速调节为700rpm，泵入上相做流动相，待建立动态平衡后，流速调节为2ml/min，同时取流动相溶解粗结晶，由进样阀进样，根据紫外检测器图谱，收集目标成分，回收试剂，干燥得到2.1g桑根酮D，经HPLC检测，含量98.2%。

实施例2：

取桑白皮药材粉碎，称量5kg，投入200L不锈钢提取罐，加6倍量90%乙醇溶液回流提取2小时，提取3次，提取液浓缩无醇调酸沉淀，沉淀物用丙酮溶解加入300g聚酰胺树脂拌样烘干，装入聚酰胺树脂柱，先取4BV50%甲醇洗脱杂质，再取60%甲醇有效成分，薄层检测，收集高浓度流分，调pH4结晶，滤出得粗结晶9g。取氯仿、甲醇、水，按7∶5∶3比例在分液漏斗中充分混合，取下相用充满高速逆流色谱柱中做固定相，转动主机，转速调节为850rpm，泵入上相做流动相，待建立动态平衡后，流速调节为3ml/min，同时取流动相溶解粗结晶，由进样阀进样，根据紫外检测器图谱，收集目标成分，回收试剂，干燥得到2.3g桑根酮D，经HPLC检测，含量95.9%。

实施例3：