[发明专利]基于MAGE-A3基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于MAGE-A3基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒。

背景技术

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是威胁生命的浆细胞性恶性肿瘤，在血液恶性肿瘤中发病率位于第二位。尽管干细胞移植以及新型药物治疗可以使病情得到有效控制，但很少有患者能够取得完全缓解甚至治愈，复发和死亡的结局仍不可避免。

分子生物学的发展使越来越多的肿瘤相关基因为人们所认知，这些重要的分子标志已在血液系统恶性肿瘤的诊断和治疗中发挥了极大的作用，在MM中虽然已发现涉及免疫球蛋白基因重排、C-MYC、RAS癌基因突变及人类端粒酶逆转录酶mRNA过度表达等，但缺乏公认的肿瘤相关的特异性诊断、微小残留病检测和预后评估的分子靶标。

癌睾丸抗原(Cancer testis antigen，CT抗原)基因是与恶性肿瘤相关的基因家族，编码免疫原性蛋白质，在过去15年间已鉴定了40多个家族，表达特点是限制性表达于正常组织睾丸、卵巢和胚胎滋养层细胞，其他正常组织几乎不表达，而在多种肿瘤组织中有不同频率的表达，且可诱导抗体介导和T细胞介导的免疫反应。基于其在肿瘤患者及正常组织中的表达特点和免疫原性，CT抗原已被认为是有应用前景的人类恶性肿瘤免疫治疗的靶标，并有可能成为重要的诊断和预后标志。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于MAGE-A3基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒。

本发明保护一种辅助诊断多发性骨髓瘤患者的试剂盒，包括特异性引物对甲和探针甲；所述特异性引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。

所述试剂盒还可包括阳性质粒；所述阳性质粒为含有MAGE-A3基因(NCBI基因库序列号：NM_005362)或其片段的重组质粒。所述阳性质粒可为含有序列表的序列7所示的MAGE-A3基因片段的重组质粒。所述阳性质粒具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列7所示的MAGE-A3基因片段连接得到的重组质粒。

所述试剂盒还可包括针对内参基因的特异性引物对乙和探针乙；所述内参基因为ABL基因(NCBI基因库序列号：NM_005157)。所述特异性引物对乙具体可为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对；所述探针乙的核苷酸序列具体可如序列表的序列6所示。

所述试剂盒还可包括内参质粒；所述内参质粒为含有ABL基因或其片段的重组质粒。所述内参质粒可为含有序列表的序列8所示的ABL基因片段的重组质粒。所述内参质粒具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列8所示的ABL基因片段连接得到的重组质粒。

所述特异性引物对甲和所述探针甲可用于制备辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒。

在多发性骨髓瘤患者的骨髓或外周血中，MAGE-A3基因表达，而在正常人的骨髓或外周血中，MAGE-A3基因不表达。且处于不同ISS期的多发性骨髓瘤患者的骨髓或外周血中，MAGE-A3基因的阳性率具有差异性。本发明的试剂盒，不仅可以应用于定性辅助诊断多发性骨髓瘤，还可以通过内参基因，测定患者MAGE-A3基因的表达水平。MAGE-A3基因的表达水平有希望成为MM辅助诊断、预后和疗效监测指标，对其进行深入研究有助于了解MM的病理机制，寻求新的治疗策略。本发明为多发性骨髓瘤的诊断提供了一条快速、可靠、准确的新途径，为疗效观察、微小残留病的动态观察提供依据。本发明将在医学检测领域发挥重要作用。

附图说明

图1为内参对照质粒RQ-PCR荧光标准曲线。

图2为阳性对照质粒的RQ-PCR荧光标准曲线。

图3为MAGE-A3基因表达量与浆细胞数和CD38+/CD138+浆细胞数的相关性结果。

图4为MAGE-A3基因的表达量与患者生存时间的相关性结果。

具体实施方式