[发明专利]基于多个基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于多个基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒。

背景技术

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是威胁生命的浆细胞性恶性肿瘤，在血液恶性肿瘤中发病率位于第二位。尽管干细胞移植以及新型药物治疗可以使病情得到有效控制，但很少有患者能够取得完全缓解甚至治愈，复发和死亡的结局仍不可避免。

分子生物学的发展使越来越多的肿瘤相关基因为人们所认知，这些重要的分子标志已在血液系统恶性肿瘤的诊断和治疗中发挥了极大的作用，在MM中虽然已发现涉及免疫球蛋白基因重排、C-MYC、RAS癌基因突变及人类端粒酶逆转录酶mRNA过度表达等，但缺乏公认的肿瘤相关的特异性诊断、微小残留病检测和预后评估的分子靶标。

癌睾丸抗原(Cancer testis antigen，CT抗原)基因是与恶性肿瘤相关的基因家族，编码免疫原性蛋白质，在过去15年间已鉴定了40多个家族，表达特点是限制性表达于正常组织睾丸、卵巢和胚胎滋养层细胞，其他正常组织几乎不表达，而在多种肿瘤组织中有不同频率的表达，且可诱导抗体介导和T细胞介导的免疫反应。基于其在肿瘤患者及正常组织中的表达特点和免疫原性，CT抗原已被认为是有应用前景的人类恶性肿瘤免疫治疗的靶标，并有可能成为重要的诊断和预后标志。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于多个基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒。

本发明提供了一种辅助诊断多发性骨髓瘤患者的试剂盒，包括引物探针组合物甲、引物探针组合物乙和引物探针组合物丙；所述引物探针组合物甲由特异性引物对甲和探针甲组成；所述引物探针组合物乙由特异性引物对乙和探针乙组成；所述引物探针组合物丙由特异性引物对丙和探针丙组成；所述特异性引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特异性引物对乙为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对；所述探针乙的核苷酸序列如序列表的序列6所示；所述特异性引物对丙为序列表的序列7所示DNA和序列表的序列8所示DNA组成的引物对；所述探针丙的核苷酸序列如序列表的序列9所示。

所述试剂盒具体可由所述引物探针组合物甲、所述引物探针组合物乙和所述引物探针组合物丙组成。

所述试剂盒还可包括引物探针组合物丁；所述引物探针组合物丁由特异性引物对丁和探针丁组成；所述特异性引物对丁为序列表的序列10所示DNA和序列表的序列11所示DNA组成的引物对；所述探针丁的核苷酸序列如序列表的序列12所示。

所述试剂盒具体可由所述引物探针组合物甲、所述引物探针组合物乙、所述引物探针组合物丙和所述引物探针组合物丁组成。

所述试剂盒还可包括阳性质粒甲、阳性质粒乙和阳性质粒丙；所述阳性质粒甲为含有MAGE-C1/CT7基因(NCBI基因库序列号：NM_005462)或其片段的重组质粒；所述阳性质粒乙为含有MAGE-A3基因(NCBI基因库序列号：NM_005362)或其片段的重组质粒；所述阳性质粒丙为含有MAGE-C2/CT10基因(NCBI基因库序列号：NM_016249)或其片段的重组质粒。

所述试剂盒还可可包括阳性质粒丁；所述阳性质粒丁为含有SSX-2基因(NCBI基因库序列号：NM_175698/003147)或其片段的重组质粒。

所述阳性质粒甲可为含有序列表的序列13所示的MAGE-C1/CT7基因片段的重组质粒。所述阳性质粒乙可为含有序列表的序列14所示的MAGE-A3基因片段的重组质粒。所述阳性质粒丙可为含有序列表的序列15所示的MAGE-C2/CT10基因片段的重组质粒。所述阳性质粒丁可为含有序列表的序列16所示的SSX-2基因片段的重组质粒。

所述阳性质粒甲具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列13所示的MAGE-C1/CT7基因片段连接得到的重组质粒。所述阳性质粒乙具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列14所示的MAGE-A3基因片段连接得到的重组质粒。所述阳性质粒丙具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列15所示的MAGE-C2/CT10基因片段连接得到的重组质粒。所述阳性质粒丁具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列16所示的SSX-2基因片段连接得到的重组质粒。

所述试剂盒还可包括针对内参基因的内参引物对和内参探针；所述内参基因为ABL基因(NCBI基因库序列号：NM_005157)。