[发明专利]一种快速检测铅离子的胶体金层析试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种快速检测铅离子的胶体金层析试纸条及其制备方法和用途，属于免疫学技术领域。

背景技术

铅是当前工业生产中的一种主要原料，对人体的危害是很大的。铅中毒可引起神经衰弱和消化不良，严重的可发生铅脑病，形成癫痈、痴呆或精神烦躁错乱，视力减退甚至失明。1923年开始在汽油中加入铅用作抗爆剂以后，更加速了全球性铅的污染。铅的污染已经遍及全球范围，格陵兰和南极的冰中含铅量已有成倍的增加。因此可以说如今世界上已难找到土壤铅含量不受人类活动影响的一片“净土”。

我国地下水质量标准（GB/T14848-93）中规定，主要适用于集中式生活饮用水水源及工、农业用水的铅离子限量≤0.05mg/L。

目前，检测铅离子的方法主要有仪器分析法和酶联免疫分析法(ELISA)。目前常用的重金属仪器分析检测方法包括：ICP-AES、石墨炉原子吸收法、紫外-可见分光光度法、原子荧光分析法等。以上这些检测方法虽然能精确测量样品中单种金属的总量，但检测相对费力、费时、费用昂贵，需要进行大量的样品预处理，且样品的检测需在大型分析设备的室内进行，不能用于现场检测。由于上述缺点的限制，检测的样品数受限制，导致在随后进行的重金属污染程度和风险的评估工作存在较大的不确定性。重金属免疫学检测方法的建立为这类污染物的检测提供了另一种途径。该方法具有检测速度较快、费用低廉、简单易携、高度的灵敏度和选择性的特点。这种方法理论上能应用于能产生合适抗体的任何污染物质。自从Reardan等人首次通过金属-鳌合剂抗原产生并分离出单克隆抗体以来(Reardan等，1985)，国外越来越多的抗Hg、In、Cd、Pb等金属鳌合剂复合物抗体被研制出来(Johnson等，2003)，能用于重金属污染物的现场快速检测和常规检测，这对于重金属污染地区的补救和恢复工作具有很大的意义，因而发展和普及应用潜力很大。国外学者通过选择或合成双功能鳌合剂鳌合重金属离子并与载体蛋白偶联制备出完全抗原，进一步制备出金属特异性单抗。目前应用免疫学检测方法检测环境中的重金属离子还处于实验室的试验阶段。

发明内容

本发明的目的：针对现有检测铅离子的技术的不足和缺陷，提供一种快速检测铅离子的金标层析试纸条的制备方法，使其能更加快速、灵敏、简便地检测铅离子残留。

本发明的技术方案：一种铅离子胶体金层析检测试纸条，由衬板（1）和在衬板上依次衔接的样品垫（2）、金标结合垫（3）、包被膜（4）和吸水垫（5）组成：金标结合垫为吸附铅离子金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上依次有用铅离子偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线T线（6），用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式隐形对照线C线（7），两条线平行排列。

   所述的衬板为不吸水的硬质塑胶条，或不吸水硬纸条；所述的样品垫为玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、或聚酯膜；所述的包被膜为硝酸纤维素膜、纯纤维素膜、或羧化纤维素膜；所述的吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。

    所述的铅离子金标抗体为胶体金标记的铅离子单克隆抗体；所述的偶联铅离子的载体蛋白为匙孔血蓝蛋白KLH，或为牛血清白蛋白BSA，螯合剂为ITCBE。

   本发明的有益效果：本发明的检测试纸条具有下列优点：

   ①特异性强，敏感性高。该胶体金层析检测试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对抗体的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，试纸条具有较强的特异性和较高的敏感性，检出最低限量可达到5ppb。

   ②简便、快速、时效性强。使用胶体金层析检测试纸条，无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，试纸条加入被检样品液后，在10min内即可判定检测结果。

   ③结果显示形象、直观、准确。检测试纸条均以显示红色线T线和C线作为检测结果阳性和阴性标记，即在包被膜上显示一条红色线C线时，表示在被检样品中含有被检物，显示两条红色线T线和C线时，表示在被检样品中不含被检物。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判。

   ④节省费用，适用范围广，便于推广。使用检测试纸条，比用仪器分析和ELISA试剂盒的费用大幅下降。另外，试纸条的适用范围广，可满足不同层次人员需要，包括专业检验，海关检疫，卫生检疫，质量监测，加工企业和养殖场户等，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济、社会效益。

附图说明