[发明专利]一种提高真菌孢子产量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种提高真菌孢子产量的方法，该方法通过适当浓度的强氧化剂处理真菌的营养菌丝，对真菌产生一定的胁迫促使真菌产生对环境具有更强适应性的器官—孢子，从而达到促使真菌产孢以提高其孢子产量。

背景技术

真菌孢子通常较其体细胞和菌丝体稳定，因而能够在恶劣的环境中生存，因此被广泛地用于生物防治或其它商业真菌产品制剂的制备（Shah FA, et al, Biol Control，2007，40，246-252；Decal A，et al, Recent Res Dev Appl Microbiol & Biotechnol，2003，1，161-175）。在商业生产上，经常需要对真菌进行人工培养，但许多真菌会因为在人工培养基上多次继代而减弱甚至丧失其产孢的能力（Kashket ER and Cao ZY，1995，FEMS Microbiol Rev，17，307-315）。

科学家们曾尝试过许多提高真菌孢子产量的研究以提高其商业生产的可行性，如低温处理，在黑暗中预培养，扫刷菌丝表面，用近紫外线处理等方法（Wang J，et al，2005，Mycosystema，24，590-596）。目前最有效和常用的方法是近紫外线处理的方法（Marsh PB，et al，1959，Pl Dis Reptr Supple，261，251-312）。已发现将壶菌，结合菌，子囊菌和担子菌的某些菌株暴露在近紫外线下都能诱导其产生孢子。但是，该方法具有一定的缺陷而不适用于商业生产。首先，受到温度的制约，例如，豌豆褐斑病（Ascochyta pisi）在5℃~30℃生长（最适温度22℃~27℃）而其在近紫外线诱导下柄子壳形态发生的温度却限制在10℃~25℃（Leach CM，1962，Can J Bot，40，1577-1602）。其次，不同菌株对某些近紫外波长有不同的阈值（Rakoczy L，1965，Acta Soc Bot Pol，34，97-112），过度的辐射还会抑制产孢（Rakoczy L，1963，Acta Soc Bot Pol，11，559-562；Rakoczy L，1965，Acta Soc Bot Pol，34，97-112）。第三，某些真菌需要近紫外光和黑暗的交替处理，例如，白菜黑斑病（Alternaria brassicae）、胡麻叶斑病（Helminthosporium oryzae）和葱叶枯病（Stemphylium botryosum）（Leach CM，1961，Can J Bot，39，705-715； Leach CM，1967，Can J Bot，39，705-715）。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种提高真菌孢子产量的方法；

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种提高真菌孢子产量的方法，其特征在于，按以下步骤进行：

1）将真菌接种到培养基上，在适宜的温度下培养5-10天；

2）向培养5-10天的真菌营养体表面喷洒500μl合适浓度的强氧化剂溶液；

3）用0.6 m/s风速的无菌风对喷洒强氧化剂溶液的真菌营养体吹送10分钟；

4）真菌营养体继续在相同的培养温度下培养3天，收集真菌产生的孢子。

本发明通过适当浓度的强氧化剂处理真菌的营养菌丝，对真菌产生一定的胁迫促使真菌产生对环境具有更强适应性的器官—孢子，从而诱导真菌产孢以提高其孢子产量。通过查新，目前尚未见有通过强氧化剂促使真菌产孢以提高其孢子产量的报道。

具体实施方式

申请人通过研究发现，适当浓度的强氧化剂能够广泛地促进各类真菌孢子的产生。

按照本发明的技术方案，一种提高真菌孢子产量的方法，按以下步骤进行：1）将真菌接种到培养基上，在适宜的温度下培养5-10天；2）向培养5-10天的真菌营养体表面喷洒500μl合适浓度的强氧化剂溶液；3）用0.6 m/s风速的无菌风对喷洒强氧化剂溶液的真菌营养体吹送10分钟；4）真菌营养体继续在相同的培养温度下培养3天，收集真菌产生的孢子。

以下是发明人给出的具体实施例，需要说明的是，在以下的实施例中，强氧化剂可以是三价钴盐、过硫酸盐、过氧化物、重铬酸钾、高锰酸钾、氧酸盐和浓硫酸等。

真菌包括真菌菌丝和各类孢子。

合适的培养温度是指在该温度下，所选择的真菌的生长速率最快。